快速內(nèi)切酶EcoRI是一系列高端快速限制性內(nèi)切酶之一，可實(shí)現(xiàn)在 5–15 分鐘內(nèi)快速完成質(zhì)粒 DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切。在通用的 CutOne? 或 CutOne? Color Buffer 中都具有優(yōu)良的活性。

艾美捷快速內(nèi)切酶EcoRI：

Cat #: C-BSM536

Size: 600 rxns

Storage: -20°C

用1μl FlyCut消化含有l(wèi)acZα基因的合適載體? EcoRI。將消化產(chǎn)物連接并轉(zhuǎn)化為大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞。在含有X-Gal、IPTG和適當(dāng)抗生素的Luria Bertani培養(yǎng)板上，成功連接的β-半乳糖苷酶基因可以表達(dá)并產(chǎn)生藍(lán)色菌落，而中斷基因（即降解的DNA末端）產(chǎn)生白色菌落。FlyCut? 限制性內(nèi)切酶必須產(chǎn)生少于1%的白色菌落。

在推薦的反應(yīng)條件下，該酶將在5“15分鐘內(nèi)消化單位底物。酶的合適反應(yīng)溫度為37”C。當(dāng)?shù)孜顳NA被ECOBI甲基化時(shí)，該限制性酶的切割可能會(huì)被阻斷或受損。當(dāng)?shù)孜锩撗鹾颂呛怂岜籈COBI甲化酶甲基化時(shí)該酶的切割也可能被阻斷或損壞。該酶可以加熱在80°C下孵育20分鐘滅活。孵育3小時(shí)不會(huì)顯示星形活性，但孵育時(shí)間較長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致星形活性

快速內(nèi)切酶EcoRI使用方法：

1.快速DNA消化方案

①將以下反應(yīng)組分按所示順序在冰上混合：

a對(duì)于純化的PCR產(chǎn)物。如果PCR產(chǎn)物未純化，則10×CutOne的量? 緩沖液應(yīng)減少到2μl，以減少未純化的PCR產(chǎn)物中剩余的金屬離子。我們建議在消化用于克隆之前純化PCR產(chǎn)物，因?yàn)橐恍〥NA聚合酶的核酸外切酶活性可能會(huì)改變切割DNA的末端。

②輕輕混合并向下旋轉(zhuǎn)；

③ 在37°C下培養(yǎng)15分鐘（質(zhì)粒DNA）或15～30分鐘（PCR產(chǎn)物）或30～60分鐘（基因組DNA）；

④ 可選：80°C加熱20分鐘滅活酶；⑤l如果在反應(yīng)中使用CutOne“”顏色緩沖液，則將反應(yīng)混合物的等分試樣直接加載在凝膠上。

2.DNA的雙重和多重消化

① 使用每種酶1μl，并適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)條件；

② 反應(yīng)混合物中酶的總體積不應(yīng)超過(guò)總反應(yīng)體積的1/10；

③如果酶需要不同的反應(yīng)溫度，從需要較低溫度的酶開(kāi)始，然后加入第二種酶并在較高溫度下孵育。

3.擴(kuò)大質(zhì)粒DNA消化反應(yīng)

Biogradetech全球生命科學(xué)和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)關(guān)鍵原料與試劑的領(lǐng)先供應(yīng)商：Biogradetech成立于2015年，總部位于美國(guó)加利福尼亞州，早期以產(chǎn)品技術(shù)研發(fā)服務(wù)起家，逐步發(fā)展了廣泛的產(chǎn)品線，并將其商業(yè)化銷售，包括蛋白質(zhì)、抗體、酶、培養(yǎng)基、試劑盒和儀器。適用于細(xì)胞生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、診斷學(xué)、生物化學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、血液分析和高通量藥物篩選等領(lǐng)域。