快速內(nèi)切酶EcoRV,一種酶切緩沖液,簡化酶切反應,良好的酶活冗余度,輕松處理底物過量或困難模板的酶切,酶切產(chǎn)物可直接點膠電泳。組分：FlyCut? EcoRV，10× CutOne? Buffer，10× CutOne? Color Buffer，保存建議-20℃

艾美捷快速內(nèi)切酶EcoRV：

Cat #: C-BSM537

Size: 200 rxns

Storage: -20°C

用1μl FlyCut消化含有l(wèi)acZα基因的合適載體? EcoRV。將消化產(chǎn)物連接并轉(zhuǎn)化為大腸桿菌感受態(tài)細胞。在含有X-Gal、IPTG和適當抗生素的Luria Bertani培養(yǎng)板上，成功連接的β-半乳糖苷酶基因可以表達并產(chǎn)生藍色菌落，而中斷基因（即降解的DNA末端）產(chǎn)生白色菌落。FlyCut? 限制性內(nèi)切酶必須產(chǎn)生少于1%的白色菌落。

在推薦的反應條件下，這種酶將在5”15分鐘內(nèi)消化單位底物。酶的合適反應溫度為37”C。當?shù)孜顳NA被羧甲基化時，用這種限制性酶的切割可能會被阻斷或受損通過80cf或20分鐘的孵育滅活at。孵育3小時不顯示星形活性，但較長的孵育可能導致星形活性。

使用方法：

1.快速DNA消化方案

①將以下反應組分按所示順序在冰上混合：

a.對于純化的PCR產(chǎn)物。如果PCR產(chǎn)物未純化，則10×CutOne的量? 緩沖液應減少到2μl，以減少未純化的PCR產(chǎn)物中剩余的金屬離子。我們建議在消化用于克隆之前純化PCR產(chǎn)物，因為一些DNA聚合酶的核酸外切酶活性可能會改變切割DNA的末端。

②輕輕混合并向下旋轉(zhuǎn)；

③ 在37°C下培養(yǎng)15分鐘（質(zhì)粒DNA）或15～30分鐘（PCR產(chǎn)物）或30～60分鐘（基因組

DNA）；

④ 可選：在80°C下加熱20分鐘使酶失活；

⑤ l如果在反應中使用CutOne“”顏色緩沖液，則將反應混合物的等分試樣直接加載在凝膠上。

2.DNA的雙重和多重消化

① 每種酶使用1μl，并適當擴大反應條件；

② 反應混合物中酶的總體積不應超過總反應體積的1/10；

③如果酶需要不同的反應溫度，從需要較低溫度的酶開始，然后加入第二種酶并在較高溫度下孵育。

3.擴大質(zhì)粒DNA消化反應

Biogradetech全球生命科學和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)關(guān)鍵原料與試劑的領(lǐng)先供應商：Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產(chǎn)品技術(shù)研發(fā)服務(wù)起家，逐步發(fā)展了廣泛的產(chǎn)品線，并將其商業(yè)化銷售，包括蛋白質(zhì)、抗體、酶、培養(yǎng)基、試劑盒和儀器。適用于細胞生物學、蛋白質(zhì)組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經(jīng)科學、血液分析和高通量藥物篩選等領(lǐng)域。