研究目的：

Wieslab 補體系統(tǒng)篩選試劑盒是一種酶免疫測定法，用于定性測定人血清中功能性經(jīng)典、MBL和替代補體途徑，其結果不得用于臨床診斷或患者管理。

補體活性受損會導致人類易患重復性暴發(fā)性或嚴重感染，并可能促進自身免疫疾病的發(fā)展。補體的不適當激活會導致慢性炎癥和組織損傷。

艾美捷補體系統(tǒng)篩選試劑盒（WIESLAB Complement System Screen）（#COMPL300）的測定原理：

Wieslab 補體測定結合了補體激活的溶血測定原理和使用特定于補體激活產(chǎn)生的新抗原的標記抗體。產(chǎn)生的新抗原量與補體途徑的功能活性成正比。

微孔板條的孔被經(jīng)典途徑、MBL途徑或替代途徑的特定激活劑包被。受試者血清在含有特定阻斷劑的稀釋液中稀釋，以確保只有相應的途徑被激活。在孔中孵育稀釋的受試者血清期間，補體通過特定包被被激活。

然后洗滌孔，并使用特定的堿性磷酸酶標記抗體檢測在MAC（膜攻擊復合物）形成期間表達的新抗原上的C5b-9。

在進一步洗滌步驟后，通過與堿性磷酸酶底物溶液孵育獲得特定抗體的檢測。補體激活量與顏色強度相關，并以吸光度（光密度（OD））來衡量。

試劑盒組件和試劑儲存：

一個框架，帶有分離孔（4x8x3），密封在帶有干燥劑的鋁箔包裝中。4條藍色經(jīng)典途徑（CP）條帶，涂有人類IgM。4條綠色MBL途徑（MP）條帶，涂有甘露糖。4條無色替代途徑（AP）條帶，涂有LPS。

10毫升CP稀釋液（Dil CP），標為藍色。

10毫升MP稀釋液（Dil MP），標為綠色。

10毫升AP稀釋液（Dil AP），標為紅色。

13毫升含有堿性磷酸酶標記的C5b-9抗體的結合物（藍色）。

13毫升即用型底物溶液。

30毫升30倍濃縮的洗滌溶液。

0.2毫升陰性對照（NC），含有人血清（應按受試者血清樣本稀釋）。

0.2毫升陽性對照（PC），含有凍干人血清，見下文“陽性對照的重組”。

試劑盒中的所有試劑都已準備好使用，除了洗滌溶液和對照品。試劑應儲存在2-8°C，除了陽性對照。陽性對照應儲存在-20°C。

所需但未提供的物料或設備：

帶有405納米濾光片的微孔板讀取器。

帶有一次性吸頭的精密移液器。

用于條帶的清洗器、吸水紙、管子和一個計時器。

結果計算：

從NC、PC和樣本中減去空白（稀釋液）（每個途徑）的吸光度。

陽性對照的吸光度應大于1，陰性對照的吸光度應小于0.2。

陰性和陽性對照可以以半定量的方式用來計算補體活性。計算樣本、PC和NC的平均OD405nm值，并按以下方式計算%補體活性：(樣本-NC)/(PC-NC)x100。陰性和陽性對照旨在監(jiān)測試劑的顯著失敗。陽性對照不能確保在測定截止值處的精確度。建議每個實驗室建立自己的參考水平和缺陷的截止值。

陰性結果，即缺陷，應始終通過測試新樣本來驗證，以確保沒有發(fā)生體外補體激活。

受試者結果：

體外補體序列的激活導致補體成分的消耗，這反過來導致它們濃度的降低。因此，補體蛋白或補體活性的測定用于指示補體系統(tǒng)是否已被免疫和/或病理機制激活。當懷疑補體激活性疾病或可能存在遺傳性缺陷時，功能性和免疫化學補體測量都用于評估患者。通過功能性測定（如Wieslab 補體試劑盒）評估的補體活性水平考慮了成分的合成、降解和消耗速率，并提供了途徑完整性的度量，與免疫化學方法相對，后者專門測量各種補體成分的濃度。當發(fā)現(xiàn)補體成分或補體功能水平降低時，臨床醫(yī)生會考慮缺陷或正在進行的免疫過程，導致成分分解增加和補體水平降低。補體水平的增加通常是急性期反應的非特異性表現(xiàn)。

三種Wieslab 補體測定的組合可以幫助檢測補體缺陷，如下表所示：

補體系統(tǒng)篩選試劑盒文獻參考：

Walport M, Complement (First of two parts) N Engl J Med 2001, 344, 1058-1066.

Walport M, Complement (Second of two parts) N Engl J Med 2001, 344, 1140-1144.

Roos A, Bouwman L, Munoz J et al. , Functional characterization of the lectin pathway of complement

in human serum. Mol Immunol 2003, 39, 655-668.

Nordin Frediksson G, Truedsson L, Sj?holm A. New procedure for detection of complement deficiency

by ELISA. J Imm Meth 1993, 166, 263-270.