細胞脂質通常存在于細胞及其細胞器的膜中。在那些儲存脂質用于能量產(chǎn)生或作為更復雜結構的來源的細胞中，脂質通常以滴狀形式出現(xiàn)，主要由甘油三酯組成，盡管其他中性脂質也可能存在。脂肪細胞分化為成熟細胞涉及脂滴的顯著積累。有一些脂質儲存疾病（如高雪氏病、尼曼-皮克病、法布里病等），其中過量脂質的積累可能導致嚴重的病理變化。油紅O是一種脂溶性偶氮染料，它優(yōu)先將中性脂質染成紅色，因此非常適合用于觀察中性脂質的積累。AkrivisBio油紅O脂質染色試劑盒還包括蘇木精用于將細胞核染成藍色，是一種簡單、經(jīng)濟的方法，可在顯微鏡下定性觀察細胞培養(yǎng)中細胞的脂質積累。該試劑盒提供了足夠的材料來染色兩個培養(yǎng)板（6孔、12孔、24孔或96孔）或五個100毫米培養(yǎng)皿。

艾美捷油紅O脂質染色試劑盒：

貨號：COS-0101

規(guī)格：用于染色兩個培養(yǎng)板（6孔、12孔、24孔或96孔）或五個100毫米培養(yǎng)皿  

樣本類型：培養(yǎng)細胞  

適用范圍：所有物種  

檢測方法：光學顯微鏡  

檢測類型：定性  

應用：在顯微鏡下觀察培養(yǎng)細胞中的脂質積累  

儲存條件：室溫  

運輸溫度：室溫  

有效期：自發(fā)貨日期起一年  

原理：  

1. 非常疏水的染料優(yōu)先在細胞培養(yǎng)中與中性脂質一起積累。  

2. 經(jīng)過足夠時間后，脂質積累會呈現(xiàn)為深紅色物體。  

油紅O脂質染色試劑盒試劑盒組成：  

PBS：50 ml（NM COS-0101A）  

10%甲醛：24 ml（NM Blue Dot COS-0101B）  

油紅O：60 mg（NM COS-0101C）  

蘇木精：24 ml（琥珀色，COS-0101D）  

0.22 um注射器過濾器：1個（COS-0101E）  

10 ml注射器：1個（COS-0101F）  

用戶自備材料：  

光學顯微鏡  

100%異丙醇  

儲存條件和操作：  

將試劑盒儲存于室溫。  

PBS、10%甲醛和蘇木精：按供應狀態(tài)即可使用。  

油紅O：向裝有油紅O粉末的瓶中加入20 ml 100%異丙醇，蓋緊瓶蓋并充分混合。讓溶液靜置20分鐘以完成溶解。如果蓋緊瓶蓋，溶液可保存一年以上。  

制備油紅O染色液：將6.7 ml油紅O溶液轉移到一個15 ml的試管中，加入4.4 ml去離子水，充分混合，靜置10分鐘。使用前15 30分鐘用注射器和過濾器過濾溶液。該溶液足夠用于一個培養(yǎng)板，穩(wěn)定時間約為2小時。  

脂質染色步驟：  

對于所有添加物，每個孔的使用量如下：  

培養(yǎng)板：96孔 48孔 24孔 12孔 6孔 100 mm培養(yǎng)皿  

100 ul 200 ul 400 ul 800 ul 1.6 ml 5.5 ml  

A. 洗滌：移去細胞培養(yǎng)基，用PBS輕輕洗滌2次。  

B. 固定：輕輕向每個孔的側面加入甲醛。處理完所有孔后，輕輕旋轉培養(yǎng)板。孵育30 60分鐘。  

C. 染色：  

1. 移去甲醛，用去離子水輕輕洗滌細胞2次。  

2. 向每個孔中加入60%異丙醇，孵育5分鐘。  

3. 移去異丙醇，加入油紅O工作液（完全覆蓋細胞）。輕輕旋轉培養(yǎng)板，孵育10 20分鐘。  

4. 移去油紅O溶液，根據(jù)需要用去離子水洗滌2 5次，直至多余染料不再明顯。丟棄未使用的染料。  

5. 加入蘇木精，孵育1分鐘。移去蘇木精，根據(jù)需要用去離子水洗滌2 5次。  

D. 觀察：在顯微鏡下觀察時，始終用去離子水覆蓋細胞。脂滴呈紅色，細胞核呈藍色。  

注意：雖然油紅O染色并非定量檢測，但可以獲得脂質含量的半定量測量：  

在蘇木精染色并用去離子水洗滌后（如上一步），用60%異丙醇洗滌3次，每次5分鐘，輕輕搖動。  

用100%異丙醇（表中所示量的一半）提取油紅O，輕輕搖動5分鐘。此程序對于小于24孔板的孔不太有用，因為較小的孔會給出較低的信號，并且處理起來效率不高。可以在492 nm處讀取吸光度。  

圖：油紅O染色細胞  

來源：Nguyen等人，2021年，《發(fā)育細胞》56卷，1437 1451頁， May 17, 2021