大腸桿菌LacZ基因是一種常用于檢測載體介導基因轉移表達效率的報告基因。它也常用于研究基因啟動子調控。LacZ編碼的β-半乳糖苷酶是一種近乎理想的表達選擇，因為它非常穩(wěn)定，抗蛋白酶降解，能夠利用多種底物，并且可以方便地在原位進行檢測。AkrivisBio的β-半乳糖苷酶染色試劑盒是一種簡單、靈敏的檢測方法，利用無色底物X-Gal生成一種強烈的藍色不溶性靛藍產物，可在顯微鏡下輕松觀察。

艾美捷β-半乳糖苷酶染色試劑盒：

貨號：COS-0104

規(guī)格：包含足夠染色20個12孔板的試劑，或等量體積的6孔板或24孔板。

樣本類型：貼壁細胞、懸浮細胞

適用范圍：所有物種

檢測方法：光學顯微鏡

檢測類型：定性

應用：用于在光學顯微鏡下觀察細胞中的β-半乳糖苷酶活性。

檢測范圍：在每孔10000 - 100000個細胞之間響應高度線性。

儲存條件：-20°C

運輸溫度：凝膠冰袋

有效期：自發(fā)貨日期起一年

β-半乳糖苷酶染色試劑盒組成：

- 固定液：125 ml（NM COS-0104-A）

- X-Gal凍干粉：綠色（COS-0104-B）

- 染色緩沖液：125 ml（WM COS-0104-C）

- 染色補充液：1.5 ml（紅色，COS-0104-D）

儲存和操作：

未開封的試劑盒應儲存于-20°C。開封后，除X-Gal應儲存于-20°C外，其他組分均可在4°C下保存。

用戶自備材料：

- PBS 約1 L

- DMSO或DMF

- 聚丙烯管（如Eppendorf等帶蓋的尖底離心管）。不要使用聚苯乙烯容器。

- 70%甘油

染色步驟：

A. 一般注意事項：

本協議適用于12孔培養(yǎng)板的孔。如果使用其他規(guī)格的培養(yǎng)板，請按比例增加或減少體積。

B. 試劑準備：

將20 mg X-Gal溶解于1 ml DMSO或DMF中，制備20X儲存液。未使用的X-Gal溶液可在-20°C下保存長達一個月。

注意：始終使用聚丙烯容器或玻璃容器來制備和儲存X-Gal溶液。不要使用聚苯乙烯容器。如果出現沉淀，只需將溶液加熱即可重新溶解沉淀物。

C. 染色：

1. 移去培養(yǎng)基，用1 ml PBS洗滌細胞一次。

2. 用0.5 ml固定液在室溫下固定細胞10 - 15分鐘。

3. 在細胞固定過程中，僅使用聚丙烯管制備以下染色液。每個孔需要0.5 ml染色液。

- 按以下比例制備足夠數量的染色液：

- 染色緩沖液：470 ?l

- 染色補充液：5 ?l

- 20 mg/ml X-Gal（溶于DMF）：25 ?l

4. 用1 ml PBS洗滌細胞兩次。

5. 向每個孔中加入0.5 ml染色液，蓋上培養(yǎng)板，于37°C孵育過夜。

6. 次日，在約200X放大倍數下用顯微鏡觀察細胞，觀察藍色的出現。

7. 對于長期保存染色后的培養(yǎng)板，移去染色液，并在細胞上覆蓋70%甘油。于4°C保存。