Propure? His-Tag-Ni-NTA樹脂能承受一定濃度的還原劑、變性劑或偶聯(lián)劑等惡劣條件，能簡單、快速、高效、高特異性地純化His-Tag-蛋白。Propure? His Tag-Ni-NTA樹脂能夠有效地從可溶性蛋白質(zhì)提取物中純化聚組氨酸標記的蛋白質(zhì)。該樹脂由固定在4%交聯(lián)瓊脂糖上的帶鎳的次氮基三乙酸（NTA）螯合物組成。Ni NTA樹脂通常被選擇用于His標記的蛋白質(zhì)純化，因為螯合物上有四個金屬結(jié)合位點，這允許高結(jié)合能力和低金屬離子浸出

艾美捷His標簽蛋白純化試劑盒：

Cat #: D-AKTP201

Size: 1 mL/1 mL*5

Storage: Stable for 12 months at 4°C

His標簽蛋白純化試劑盒樣品制備：

A從細菌或酵母中提取蛋白質(zhì)

1.誘導蛋白質(zhì)表達后，將細菌或酵母培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到離心管中，在

7000轉(zhuǎn)/分以收集細菌或酵母。

2.與10倍體積的裂解緩沖液（收集的細菌或酵母：裂解緩沖液=1:10）混合，加入最終濃度為1mM的PMSF。建議添加最終濃度為0.2-0.4mg/mL的溶菌酶。

3.對細胞進行復蘇。如果細胞濃度較高，則添加10μg/ml RNase A和5μg/ml DNase I。將懸浮液混合并在冰中浸泡，保持裂解液清潔。

4.將干凈的裂解物轉(zhuǎn)移到新的離心管中，以10000rpm，4C離心20-30分鐘。取上清液，在-20℃的冰上儲存。

B從酵母、昆蟲或哺乳動物細胞中提取的可溶性蛋白質(zhì)

1.將細胞培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到離心管中，以5000rpm離心10分鐘以收集懸浮液。如果懸浮液中含有EDTA、組氨酸和其他還原劑，則應使用賴氨酸緩沖液對懸浮液進行透析。

2.大體積懸浮液應采用硫酸銨分級沉淀法濃縮，然后用賴氨酸緩沖液透析。

C用于在變性條件下純化的包涵體蛋白質(zhì)提取

1.將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到離心管中，以7000rpm離心15分鐘以收集沉淀。拆下懸架。

2.與10倍體積的賴氨酸緩沖液混合，如收集的沉淀：賴氨酸緩沖劑=1:10（W/N）。裂解緩沖液不含8M尿素。恢復降水。將懸浮液在冰中混合并超聲處理。

3.將裂解物轉(zhuǎn)移到新的離心管中，在10000rpm、4℃下離心20-30分鐘。處理上清液，再次重復步驟2和3。

4.與10倍體積的賴氨酸緩沖液混合，如收集的沉淀：賴氨酸緩沖劑=1:10（W/N）。在變性條件下，重新懸浮培養(yǎng)液進行純化。

通常，在需要用金屬離子重新充電之前，Ni NTA樹脂可以至少使用五次。當背壓過高或容量顯著降低時，需要剝離金屬離子，并按照以下程序?qū)渲潆姡?/span>

1.用5個樹脂床體積的去離子水洗滌樹脂；

2.100mM EDTA（pH 8.0），5個樹脂床體積；

3.用10個樹脂床體積的去離子水洗滌樹脂；

4.用5個樹脂床體積的0.5M NaOH洗滌樹脂，并停留10-15分鐘；

5.用10個樹脂床體積的去離子水洗滌樹脂；

6.100mM Nitso8324；3-5個樹脂床體積；

7.用10個樹脂床體積的去離子水洗滌樹脂；再生后，培養(yǎng)基可以立即使用，也可以在4°C下儲存在含有20%乙醇的PBS中。

His標簽蛋白純化試劑盒化學相容性：

Biogradetech是生命科學和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)關鍵原料與試劑的領先供應商：Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產(chǎn)品技術研發(fā)服務起家，逐步發(fā)展了廣泛的產(chǎn)品線，并將其商業(yè)化銷售，包括蛋白質(zhì)、抗體、酶、培養(yǎng)基、試劑盒和儀器。適用于細胞生物學、蛋白質(zhì)組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經(jīng)科學、血液分析和高通量藥物篩選等領域。