Epigenase m6A 甲基化酶活性/抑制比色法檢測試劑盒：快速、靈敏、高通量適配

一、產品概述

Epigenase m6A 甲基化酶活性/抑制比色法檢測試劑盒，由Cytoskeleton推出，艾美捷代理，它是一套完整的優化緩沖液與試劑組合，專用于定量檢測總 m6A 甲基化酶（甲基轉移酶）的活性或抑制效果。該試劑盒適用于從哺乳動物、植物、真菌及細菌等多種物種來源的樣本，包括但不限于培養細胞、新鮮組織及冷凍組織，可使用核提取物或純化的 m6A 甲基化酶（如 METTL3/METTL14）作為輸入材料。

二、核心優勢與特點

特性 | 描述

快速 | 比色法檢測，操作步驟簡便，整個流程可在4 小時內完成

穩健 | 創新的試劑盒組成使背景信號極低，檢測簡單、準確、可靠且一致

便捷 | 兼容細胞/組織核提取物和純化蛋白，支持體內外抑制效應檢測

靈敏且特異 | 新型檢測原理直接識別 m6A 甲基化酶轉化的終產物，特異性優于副產物檢測法；最低可檢測2 ?g 核提取物或50 ng 純化酶

定量 | 提供檢測標準品，可對 m6A 甲基化酶的比活性進行絕對定量

靈活 | 條板式微孔板格式，支持手動或高通量分析

三、背景信息

N6甲基腺苷（m6A） 是真核生物 RNA 分子上最常見、最豐富的修飾，也存在于原核生物和病毒中。近期研究發現，DNA m6A 同樣存在于多細胞真核生物（如秀麗隱桿線蟲、黑腹果蠅）以及高等真核生物（包括植物、小鼠和人類細胞）中。

m6A 在調控以下生物學過程中發揮關鍵作用：

DNA 復制與損傷修復

RNA 剪接與轉座

轉錄調控與細胞防御

在人類細胞中，m6A 修飾由甲基轉移酶（“寫入器”） 催化完成，包括 METTL3/METTL14、WTAP、RBM15/15B 和 KIAA1429 等；而去除修飾則由α酮戊二酸（αKG）和 Fe2+ 依賴的去甲基酶（“擦除器”） 完成，如 FTO、ALKBH5 和 TET 樣酶。

研究表明，m6A 甲基化酶與去甲基化酶在發育、代謝、生育及多種疾病（包括癌癥和病毒感染）的發病機制中扮演重要角色。DNA/RNA 上的動態可逆 m6A 修飾被視為一種具有深遠生物學意義的新型表觀遺傳標記。

m6A 修飾上調：可增強病毒復制，促進癌癥生長。

m6A 修飾下調：首次在人類癌細胞和組織中被發現（與正常對照相比）。

四、檢測原理與流程

本試劑盒采用比色法檢測總 m6A 甲基化酶活性/抑制，核心原理如下：

1.底物包被：獨特的 m6A 底物被穩定包被于條板微孔中。

2.甲基化反應：活性 m6A 甲基化酶與底物結合，并對底物中的 m6A 位點進行甲基化。

3.免疫識別：未被去甲基化的 m6A 位點可被高親和力的抗 m6A 抗體特異性識別。

4.信號增強與定量：加入增強液放大免疫信號，通過 ELISA 樣顯色反應，利用酶標儀進行比色定量。

五、檢測流程概覽（總時長 ≤4 小時）

1.樣本準備：提取核蛋白或稀釋純化酶至適當濃度。

2.甲基化反應：將樣本加入包被有 m6A 底物的微孔中，室溫孵育 90–120 分鐘。

3.抗體結合：加入抗 m6A 抗體，孵育 60 分鐘。

4.信號增強：加入增強液，孵育 30 分鐘。

5.顯色與讀數：加入顯色底物，避光孵育 10–15 分鐘，終止后于 450 nm 讀取吸光度。

6.定量計算：利用試劑盒提供的標準品繪制標準曲線，計算樣本的比活性（單位：pmol/min/mg）。

六、應用場景

體內外 m6A 甲基化酶抑制劑篩選：使用核提取物評估化合物在細胞內的抑制效果；使用純化酶進行體外 IC50 測定。

不同生理或病理狀態下 m6A 甲基化酶活性比較：如癌癥 vs 正常組織、藥物處理 vs 對照。

基因敲低/過表達對甲基化酶活性的影響：結合 RNAi 或 CRISPR 技術。

不同物種 m6A 甲基化酶的功能保守性研究：從細菌到哺乳動物的寬泛適用性。

七、注意事項與操作要點

1.樣本保存：核提取物建議分裝后于 80°C 保存，避免反復凍融。純化酶按供應商說明保存。

2.背景控制：務必設置無酶對照（用緩沖液替代樣本），以扣除背景信號。

3.標準曲線：每批次實驗均應重新制備標準曲線，確保定量準確性。

4.高通量格式：條板可拆卸，可根據樣本數量選擇所需條數，剩余板條密封保存于 4°C。

5.干擾物質：核提取物中的高濃度 EDTA、DTT 或去垢劑可能抑制甲基化酶活性，建議使用試劑盒提供的專用緩沖液進行透析或稀釋。

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