一、產(chǎn)品概述

Epigenase m6A 甲基化酶活性/抑制比色法檢測(cè)試劑盒，由Cytoskeleton推出，艾美捷代理，它是一套完整的優(yōu)化緩沖液與試劑組合，專用于定量檢測(cè)總 m6A 甲基化酶（甲基轉(zhuǎn)移酶）的活性或抑制效果。該試劑盒適用于從哺乳動(dòng)物、植物、真菌及細(xì)菌等多種物種來源的樣本，包括但不限于培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮組織及冷凍組織，可使用核提取物或純化的 m6A 甲基化酶（如 METTL3/METTL14）作為輸入材料。

二、核心優(yōu)勢(shì)與特點(diǎn)

特性 | 描述

快速 | 比色法檢測(cè)，操作步驟簡(jiǎn)便，整個(gè)流程可在4 小時(shí)內(nèi)完成

穩(wěn)健 | 創(chuàng)新的試劑盒組成使背景信號(hào)極低，檢測(cè)簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、可靠且一致

便捷 | 兼容細(xì)胞/組織核提取物和純化蛋白，支持體內(nèi)外抑制效應(yīng)檢測(cè)

靈敏且特異 | 新型檢測(cè)原理直接識(shí)別 m6A 甲基化酶轉(zhuǎn)化的終產(chǎn)物，特異性優(yōu)于副產(chǎn)物檢測(cè)法；最低可檢測(cè)2 ?g 核提取物或50 ng 純化酶

定量 | 提供檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品，可對(duì) m6A 甲基化酶的比活性進(jìn)行絕對(duì)定量

靈活 | 條板式微孔板格式，支持手動(dòng)或高通量分析

三、背景信息

N6甲基腺苷（m6A） 是真核生物 RNA 分子上最常見、最豐富的修飾，也存在于原核生物和病毒中。近期研究發(fā)現(xiàn)，DNA m6A 同樣存在于多細(xì)胞真核生物（如秀麗隱桿線蟲、黑腹果蠅）以及高等真核生物（包括植物、小鼠和人類細(xì)胞）中。

m6A 在調(diào)控以下生物學(xué)過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用：

DNA 復(fù)制與損傷修復(fù)

RNA 剪接與轉(zhuǎn)座

轉(zhuǎn)錄調(diào)控與細(xì)胞防御

在人類細(xì)胞中，m6A 修飾由甲基轉(zhuǎn)移酶（“寫入器”） 催化完成，包括 METTL3/METTL14、WTAP、RBM15/15B 和 KIAA1429 等；而去除修飾則由α酮戊二酸（αKG）和 Fe2+ 依賴的去甲基酶（“擦除器”） 完成，如 FTO、ALKBH5 和 TET 樣酶。

研究表明，m6A 甲基化酶與去甲基化酶在發(fā)育、代謝、生育及多種疾病（包括癌癥和病毒感染）的發(fā)病機(jī)制中扮演重要角色。DNA/RNA 上的動(dòng)態(tài)可逆 m6A 修飾被視為一種具有深遠(yuǎn)生物學(xué)意義的新型表觀遺傳標(biāo)記。

m6A 修飾上調(diào)：可增強(qiáng)病毒復(fù)制，促進(jìn)癌癥生長(zhǎng)。

m6A 修飾下調(diào)：首次在人類癌細(xì)胞和組織中被發(fā)現(xiàn)（與正常對(duì)照相比）。

四、檢測(cè)原理與流程

本試劑盒采用比色法檢測(cè)總 m6A 甲基化酶活性/抑制，核心原理如下：

1.底物包被：獨(dú)特的 m6A 底物被穩(wěn)定包被于條板微孔中。

2.甲基化反應(yīng)：活性 m6A 甲基化酶與底物結(jié)合，并對(duì)底物中的 m6A 位點(diǎn)進(jìn)行甲基化。

3.免疫識(shí)別：未被去甲基化的 m6A 位點(diǎn)可被高親和力的抗 m6A 抗體特異性識(shí)別。

4.信號(hào)增強(qiáng)與定量：加入增強(qiáng)液放大免疫信號(hào)，通過 ELISA 樣顯色反應(yīng)，利用酶標(biāo)儀進(jìn)行比色定量。

五、檢測(cè)流程概覽（總時(shí)長(zhǎng) ≤4 小時(shí)）

1.樣本準(zhǔn)備：提取核蛋白或稀釋純化酶至適當(dāng)濃度。

2.甲基化反應(yīng)：將樣本加入包被有 m6A 底物的微孔中，室溫孵育 90–120 分鐘。

3.抗體結(jié)合：加入抗 m6A 抗體，孵育 60 分鐘。

4.信號(hào)增強(qiáng)：加入增強(qiáng)液，孵育 30 分鐘。

5.顯色與讀數(shù)：加入顯色底物，避光孵育 10–15 分鐘，終止后于 450 nm 讀取吸光度。

6.定量計(jì)算：利用試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本的比活性（單位：pmol/min/mg）。

六、應(yīng)用場(chǎng)景

體內(nèi)外 m6A 甲基化酶抑制劑篩選：使用核提取物評(píng)估化合物在細(xì)胞內(nèi)的抑制效果；使用純化酶進(jìn)行體外 IC50 測(cè)定。

不同生理或病理狀態(tài)下 m6A 甲基化酶活性比較：如癌癥 vs 正常組織、藥物處理 vs 對(duì)照。

基因敲低/過表達(dá)對(duì)甲基化酶活性的影響：結(jié)合 RNAi 或 CRISPR 技術(shù)。

不同物種 m6A 甲基化酶的功能保守性研究：從細(xì)菌到哺乳動(dòng)物的寬泛適用性。

七、注意事項(xiàng)與操作要點(diǎn)

1.樣本保存：核提取物建議分裝后于 80°C 保存，避免反復(fù)凍融。純化酶按供應(yīng)商說明保存。

2.背景控制：務(wù)必設(shè)置無酶對(duì)照（用緩沖液替代樣本），以扣除背景信號(hào)。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線：每批次實(shí)驗(yàn)均應(yīng)重新制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，確保定量準(zhǔn)確性。

4.高通量格式：條板可拆卸，可根據(jù)樣本數(shù)量選擇所需條數(shù)，剩余板條密封保存于 4°C。

5.干擾物質(zhì)：核提取物中的高濃度 EDTA、DTT 或去垢劑可能抑制甲基化酶活性，建議使用試劑盒提供的專用緩沖液進(jìn)行透析或稀釋。

相關(guān)產(chǎn)品：

N6methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody

EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit (Colorimetric)

Epigenase m6A Demethylase Activity/Inhibition Assay Kit (Colorimetric)