自主神經(jīng)系統(tǒng)（Autonomic Nervous System, ANS）與免疫系統(tǒng)之間存在著密切的聯(lián)系。ANS通過神經(jīng)纖維直接支配淋巴器官，包括脾臟，從而提供了中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）與免疫系統(tǒng)之間的橋梁。在脾臟中，已知的唯一神經(jīng)抑制炎癥的機制依賴于由脾臟去甲腎上腺素能纖維產(chǎn)生的去甲腎上腺素，這種去甲腎上腺素與CD4+ T細胞上的β2腎上腺素能受體（β2-ARs）結(jié)合，進而觸發(fā)乙酰膽堿的釋放。乙酰膽堿隨后通過與髓樣細胞上的α7煙堿型乙酰膽堿受體（α7nAChRs）結(jié)合，抑制炎癥細胞因子的分泌。盡管迷走神經(jīng)抗炎通路在嚙齒類動物中得到了廣泛研究，但尚不清楚是否還存在其他神經(jīng)通路。

“Apical splenic nerve electrical stimulation discloses an anti-inflammatory pathway relying on adrenergic and nicotinic receptors in myeloid cells”旨在探討脾臟神經(jīng)在調(diào)節(jié)炎癥中的作用，并確定是否存在除迷走神經(jīng)抗炎通路之外的其他神經(jīng)通路。特別地，研究關(guān)注于脾臟神經(jīng)的解剖和功能特性，以及電刺激這些神經(jīng)對炎癥的影響。

實驗方法：

1. 動物模型與分組：實驗使用了多種小鼠品系，包括C57BL/6、DBA、Foxn1-/-（T細胞缺陷）、Rag1-/-（T和B細胞缺陷）、LysM-Cre:Adrb2fl/fl（髓系細胞β2-ARs敲除）、LysM-Cre:Chrna7fl/fl（髓系細胞α7nAChRs敲除）等。實驗分為多個組別，包括假手術(shù)組（SHAM）、不同神經(jīng)刺激組（如迷走神經(jīng)刺激、動脈脾神經(jīng)刺激、頂端脾神經(jīng)刺激）以及不同基因敲除小鼠組。

2. 神經(jīng)刺激與參數(shù)：使用特制的電極對小鼠的迷走神經(jīng)、動脈脾神經(jīng)或頂端脾神經(jīng)進行電刺激。刺激參數(shù)為矩形雙相脈沖，脈沖幅度為650 ?A，脈沖寬度為100 ?s，頻率為10 Hz，持續(xù)時間為2分鐘。

3. 生理指標監(jiān)測：在麻醉小鼠中監(jiān)測頸動脈血壓和心率，以評估神經(jīng)刺激對心血管系統(tǒng)的影響。

4. 炎癥模型與評估：使用脂多糖（LPS）誘導(dǎo)小鼠內(nèi)毒素血癥模型，通過檢測血清中腫瘤壞死因子（TNF）水平評估炎癥反應(yīng)。此外，還使用了chondrexII型膠原（ 貨號20022）和與弗氏完全佐劑（貨號:7009， 完全弗氏佐劑，2mg/ml）混合后免疫DBA小鼠，成功誘導(dǎo)了關(guān)節(jié)炎，通過臨床評分、組織病理學分析等方法評估關(guān)節(jié)炎的嚴重程度。

如上圖：DBA小鼠在第0天用II型膠原蛋白進行免疫接種，并將電極植入第11天脾臟頂部的脾神經(jīng)。在第21天，用II型膠原蛋白對小鼠進行加強免疫在35天內(nèi)每2-3天監(jiān)測一次臨床癥狀。數(shù)據(jù)顯示關(guān)節(jié)炎小鼠的百分比（a），平均臨床評分（b）和平均厚度后爪（c）。

實驗結(jié)果：

1. 神經(jīng)解剖與功能分析：通過免疫組織化學和激光共聚焦顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)小鼠脾臟有三條神經(jīng)分支：兩條與動脈相關(guān)，包含兒茶酚胺能纖維；另一條位于脾臟頂端，同時包含兒茶酚胺能纖維和膽堿能纖維。電刺激頂端神經(jīng)而非動脈神經(jīng)能顯著增加脾臟中ACh的含量，且這種增加不依賴于T細胞。

2. 神經(jīng)刺激對炎癥的抑制作用：電刺激迷走神經(jīng)、動脈脾神經(jīng)或頂端脾神經(jīng)均能抑制LPS誘導(dǎo)的TNF產(chǎn)生，但機制不同。迷走神經(jīng)和動脈脾神經(jīng)刺激依賴于T細胞，而頂端脾神經(jīng)刺激不依賴于T細胞，且其抑制作用可被β2-ARs和α7nAChRs的拮抗劑所阻斷，表明頂端脾神經(jīng)刺激通過平行作用于髓系細胞上的β2-ARs和α7nAChRs來抑制炎癥。

3. 頂端脾神經(jīng)刺激對CIA的抑制作用：在CIA小鼠中，電刺激頂端脾神經(jīng)顯著延遲了關(guān)節(jié)炎的發(fā)病時間，減輕了疾病嚴重程度，減少了關(guān)節(jié)腫脹和骨侵蝕，并降低了脾臟中炎癥性單核細胞的數(shù)量。這些結(jié)果表明，頂端脾神經(jīng)刺激可能通過抑制全身炎癥反應(yīng)來減輕關(guān)節(jié)炎癥狀。

在本研究中，Chondrex的牛II型膠原被用于建立膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎（CIA）模型。該模型是關(guān)節(jié)炎研究中的經(jīng)典模型之一，能夠模擬關(guān)節(jié)炎的病理特征和臨床表現(xiàn)。牛II型膠原作為CIA模型的誘導(dǎo)劑，通過與弗氏完全佐劑混合后注射到小鼠體內(nèi)，成功誘導(dǎo)了關(guān)節(jié)炎的發(fā)生和發(fā)展。

艾美捷免疫級牛源II， IX 和 XI 型膠原蛋白（免疫接種級別）：

20011      Immunization Grade Chick Type II Collagen, 10 mg, lyophilized

20012      Immunization Grade Chick Type II Collagen, 2 mg/ml x 5 ml

20021      Immunization Grade Bovine Type II Collagen, 10 mg, lyophilized

20022      Immunization Grade Bovine Type II Collagen, 2 mg/ml x 5ml

20031      Immunization Grade Porcine Type II Collagen, 10 mg, lyophilized

20032      Immunization Grade Porcine Type II Collagen, 2 mg/ml x 5ml

20041      Immunization Grade Rat Type II Collagen, 5 mg, lyophilized

20042      Immunization Grade Rat Type II Collagen, 2 mg/ml x 2.5 ml

20051      Immunization Grade Human Type II Collagen, 1 mg, lyophilized

20052      Immunization Grade Human Type II Collagen, 2 mg/ml x 0.5 ml

20061      Immunization Grade Mouse Type II Collagen, 1 mg, lyophilized

20062      Immunization Grade Mouse Type II Collagen, 2 mg/ml x 0.5 ml

20071      Imunization Grade Goat Type II Collagen, 5 mg, lyophilized

1071      Immunization Grade Chick Type IX Collagen, 5 mg, lyophilized

1072      Immunization Grade Bovine Type IX Collagen, 5 mg, lyophilized

1073      Immunization Grade Porcine Type IX Collagen, 5 mg, lyophilized

1081      Immunization Grade Chick Type XI Collagen, 5 mg, lyophilized

1082      Immunization Grade Bovine Type XI Collagen, 5 mg, lyophilized

1083      Immunization Grade Porcine Type XI Collagen, 5 mg, lyophilized

1085      Immunization Grade Human Type XI Collagen, 1 mg, lyophilized