總BTK檢測(cè)試劑盒是一種均相時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移（TR-FRET）夾心免疫分析法（見圖1）。THUNDER?細(xì)胞信號(hào)分析工作流程包括3個(gè)步驟（見圖2）。細(xì)胞經(jīng)過處理后，首先使用試劑盒提供的特異性裂解緩沖液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解。然后，通過一對(duì)熒光標(biāo)記抗體以簡單的“添加-孵育-測(cè)量”格式（單步試劑添加；無需洗滌步驟）檢測(cè)細(xì)胞裂解液中的總BTK。其中，一個(gè)抗體標(biāo)記有供體熒光團(tuán)（銪螯合物；Eu-Ab1），另一個(gè)標(biāo)記有遠(yuǎn)紅接受體熒光團(tuán)（FR-Ab2）。兩個(gè)標(biāo)記抗體與目標(biāo)蛋白上不同的表位結(jié)合，使兩種染料靠近。用閃光燈（320或340納米）或激光（337納米）激發(fā)供體銪螯合物分子，會(huì)觸發(fā)從供體到接受體分子的FRET，進(jìn)而發(fā)出665納米的TR-FRET信號(hào)。銪螯合物殘留的能量會(huì)在615納米處產(chǎn)生光。665納米處的信號(hào)與細(xì)胞裂解液中總BTK的濃度成正比。數(shù)據(jù)可以表示為665納米處的信號(hào)，或665納米/615納米的比值。

作為BioAuxilium在中國區(qū)域合作伙伴，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAuxilium熱銷產(chǎn)品THUNDER全BTK TR-FRET細(xì)胞信號(hào)檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

THUNDER全BTK TR-FRET細(xì)胞信號(hào)檢測(cè)試劑盒組分：

Eu-總BTK（5微升）

Acc-總BTK（20微升）

BTK對(duì)照裂解液（100微升）

5X裂解緩沖液2（1毫升）

10X TR-FRET檢測(cè)緩沖液（50微升）

10X磷酸酶抑制劑混合液（50微升）

驗(yàn)證數(shù)據(jù)：

該分析試劑盒已通過2板分析協(xié)議驗(yàn)證，可用于相對(duì)定量Raji細(xì)胞裂解液中的總BTK。

非貼壁細(xì)胞在RPMI+10%胎牛血清中培養(yǎng)，之后離心并用無血清RPMI重懸至所需密度。

細(xì)胞經(jīng)過處理后，用5X裂解緩沖液2（最終濃度為1X）裂解細(xì)胞，并加入100X磷酸酶抑制劑混合液（稀釋至5X）。

在室溫下于軌道振蕩器（400轉(zhuǎn)/分鐘）孵育30分鐘后，將裂解液（15微升）轉(zhuǎn)移至384孔分析板中，然后加入標(biāo)記抗體Eu-Ab1和FR-Ab2（5微升）以檢測(cè)總BTK。

在室溫下孵育4小時(shí)后，記錄665納米和615納米處的TR-FRET信號(hào)（EnVision?；燈激發(fā)）。

BioAuxilium成立于2013年，基于其專有的TR-FRET技術(shù)，開發(fā)出了數(shù)百個(gè)用于細(xì)胞蛋白和生物標(biāo)志物定量分析的Thunder系列TR-FRET檢測(cè)試劑盒。該公司專注于設(shè)計(jì)、開發(fā)和生產(chǎn)高質(zhì)量、經(jīng)過充分驗(yàn)證的TR-FRET檢測(cè)試劑盒，簡化實(shí)驗(yàn)室工作流程，加速生物醫(yī)學(xué)研究。

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