大腸桿菌來源的α-半乳糖苷酶能夠從復(fù)雜碳水化合物和糖蛋白中切割α(1-3)和α(1-6)連接的非還原末端半乳糖。它對α(1-4)連接的半乳糖沒有活性。當(dāng)pH值必須保持中性或更高時，例如在活細胞中，它特別有效地去除α連接的半乳糖。

對于切割β-半乳糖苷酶，推薦使用肺炎鏈球菌來源的β-(1-4)半乳糖苷酶（E-BG07），或者是從牛睪丸中純化的β-(1,3,4,6)半乳糖苷酶（E-BG02）。

艾美捷QA-Bio-α-半乳糖苷酶：

貨號：LZ-ACASE-KIT

來源：通過在大腸桿菌中重組表達

內(nèi)容物：50 mM 磷酸鈉，pH 7.5中的α-半乳糖苷酶

包含在20 μL和60 μL包裝規(guī)格中：

5倍反應(yīng)緩沖液 – 250 mM 磷酸鈉，pH 6.5

比活性：>30 U/mg

活性：80 U/ml

分子量：~80,000 道爾頓

建議用法：

向管中加入高達100 μg的糖蛋白或1 nmol的寡糖。

加水至13 μL。

加入4 μL 5倍反應(yīng)緩沖液。

加入2 μL α(1-3,6)半乳糖苷酶。

在37°C下孵化1小時。

注意：如果倒數(shù)第二個糖是巖藻糖，則需要更長時間的孵化。

特異性：從復(fù)雜碳水化合物和糖蛋白中切割α-(1-3)和α-(1-6)連接的非還原末端半乳糖。

比活性：一個單位的α-(1-3,6)-半乳糖苷酶定義為在25°C pH 6.5條件下，1分鐘內(nèi)產(chǎn)生1 μmole的對硝基苯酚（pNP）所需的酶量，來自對硝基苯基-α-D-半乳糖苷。

儲存：將酶儲存在4?C。

純度：每批α-半乳糖苷酶都經(jīng)過以下方式測試污染性蛋白酶；10 μg的變性牛血清白蛋白與2 μL的酶一起孵化24小時。經(jīng)處理的BSA的SDS-PAGE分析顯示沒有降解跡象。

生產(chǎn)宿主菌株經(jīng)過廣泛測試，不產(chǎn)生任何可檢測的糖苷酶。

穩(wěn)定性：在適當(dāng)儲存的條件下至少穩(wěn)定12個月。暴露在環(huán)境溫度下幾天不會降低活性。

QA-Bio-α-半乳糖苷酶文獻參考：

1. Kobata, A. Use of endo- and exoglycosidases for structural studies of glycoconjugates. Anal Biochem 100: 1- 14 (1979).

2. Prime, S. J. Dearnley, A.M. Venton, R.B. Parekh and C.J. Edge. Oligosaccharide sequencing based on exo- and endoglycosidase digestion and liquid chromatographic analysis of the products. J Chromatogr A 720: 263-274 (1996)

3. Dwek, R.A. , C.J. Edge, D.J. Harvey, M.R. Wormald and R.B. Parekh. Analysis of glycoprotein-associated oligosaccharides. Ann Rev Biochem 62: 65-100.

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