N-乙酰氨基葡萄糖苷酶能夠從復雜碳水化合物和糖蛋白中切割所有非還原末端β連接的N-乙酰氨基葡萄糖殘基。

在二、三和四天線寡糖上，GlcNAc的不同連接的切割速率在很大程度上取決于鄰近殘基的空間阻礙。與β(1-3)連接的甘露糖相連的β(1-2)GlcNAc殘基的切割速率最高，而與β(1-6)連接的甘露糖相連的β(1-2)GlcNAc殘基的切割速率最低。當存在β(1-6)GlcNAc殘基時，其以第二高的速率被移除，而β(1-4)GlcNAc則以第三高的速率被移除。在三天線結構上，這個殘基以第二高的速率被移除。雙分叉的β(1-4)GlcNAc連接到β連接的甘露糖嚴重阻礙了其他GlcNAc殘基的切割——需要高濃度的酶和長時間的孵化才能進行切割。

艾美捷QA-Bio-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶：

貨號：E-GL01

來源：于在大腸桿菌中重組表達的肺炎鏈球菌。

EC： 3.2.1.52

內(nèi)容物：20 mM Tris-HCl，25 mM NaCl，pH 7.5中的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶

包含在20 μL和60 μL包裝規(guī)格中：

5倍反應緩沖液 250 mM 磷酸鈉，pH 5.0

比活性： >80 U/mg

活性 ：>50 U/ml

分子量： ~140,000 道爾頓

pH范圍 ：5-7，最佳pH 5.0

建議用法：

向管中加入高達100 μg的糖蛋白或1 nmol的寡糖。

用去離子水調(diào)整至14 μl的最終體積。

加入4 μl 5倍反應緩沖液（pH 5.0）。

加入2 μl的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。

在37?C下孵化3小時。

注意：如果存在雙分叉GlcNAc或beta(1-2)GlcNAc-alpha(1-6)Man，則將孵化時間增加至18小時。

特異性 ：切割所有非還原末端β連接的N-乙酰氨基葡萄糖。雙分叉GlcNAc減慢反應速度。

比活性測定： 定義為在37?C，pH 5.0條件下，1分鐘內(nèi)產(chǎn)生1 μmole的對硝基苯酚所需的酶量，來自對硝基苯基-β-D-N-乙酰氨基葡萄糖苷。

儲存 ：將酶儲存在4?C。

純度 ：每批N-乙酰氨基葡萄糖苷酶都經(jīng)過以下方式測試污染性蛋白酶；10 μg的變性牛血清白蛋白與2 μL的酶一起孵化24小時。經(jīng)處理的BSA的SDS-PAGE分析顯示沒有降解跡象。

生產(chǎn)宿主菌株經(jīng)過廣泛測試，不產(chǎn)生任何可檢測的糖苷酶。

穩(wěn)定性： 在適當儲存的條件下至少穩(wěn)定12個月。暴露在環(huán)境溫度下幾天不會降低活性。

QA-Bio-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶文獻參考：

Clarke, V. A., N. Platt and T.D. Betters. Cloning and expression of the beta-N-acetylglucosaminidase gene from Steptococcus pneumoniae. Generation of truncated enzymes with modified aglyconn specificity. J Biol Chem 270:8805-8814 (1995).

Dwek, R. A., C. J. Edge, D. J. Harvey, M. R. Wormald and R. B. Parekh. Analysis of glycoprotein-associated oligosaccharides. Ann Rev Biochem 62: 65-100 (1993).

Glasgow, L.R., J.C. Paulson and R.L. Hill. Systematic purification of five glycosidases from Streptococcus pneumoniae J Biol Chem 252:8615-8623(1977).

Kobata, A. Use of endo- and exoglycosidases for structural studies of glycoconjugates. Anal Biochem 100: 1-14 (1979).

Prime, S., J. Dearnley , A. M. Venton, R. B. Parekh and C. J. Edge. Oligosaccharide sequencing based on exo- and endoglycosidase digestion and liquid chromatographic analysis of the products. J Chromatogr A 720: 263-274 (1996).

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