RNA（核糖核酸）的修飾在RNA分子的功能、完整性、代謝和生物合成中起著至關(guān)重要的作用。目前已發(fā)現(xiàn)超過(guò)100種RNA修飾，其中大多數(shù)發(fā)生在轉(zhuǎn)運(yùn)RNA（tRNA）中，但它們也可以在核糖體RNA（rRNA）、小核RNA（snRNA）、信使RNA（mRNA）和長(zhǎng)非編碼RNA（ncRNA）中找到。修飾核苷的尿液排泄與多種癌癥、艾滋病和其他惡性疾病狀態(tài)有關(guān)。

1-甲基腺苷（m1A）是一種顯著的可逆轉(zhuǎn)錄后RNA修飾，影響tRNA和rRNA的功能和結(jié)構(gòu)。1-甲基腺苷出現(xiàn)在tRNA的第9、14和58位，其中第58位（m1A58）對(duì)tRNA的穩(wěn)定化很重要。甲基轉(zhuǎn)移酶催化將甲基添加到腺苷堿基結(jié)構(gòu)的第一個(gè)氮原子上，從而使分子帶上正電荷。該反應(yīng)是可逆的，去甲基化酶如ALKBH3可以逆轉(zhuǎn)這一過(guò)程。1-甲基腺苷可以影響核糖體的生物合成、細(xì)菌中的抗生素抗性、tRNA對(duì)環(huán)境壓力的反應(yīng)，并干擾沃森-克里克堿基配對(duì)，最終影響逆轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)翻譯。

癌癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和艾滋病患者的尿液樣本中均顯示出高水平的m1A，這支持了其作為功能性檢測(cè)生物標(biāo)志物的作用。在應(yīng)激條件下，已檢測(cè)到血清中1-甲基腺苷水平升高。最近關(guān)于1-甲基腺苷的研究正在揭示其新的作用和機(jī)制。盡管DNA中的m1A被認(rèn)為是一種導(dǎo)致基因組突變的損傷形式，因此需要修復(fù)，但內(nèi)源性酶在RNA中增殖m1A修飾。第9位的m1A（m1A9）已知可以穩(wěn)定tRNA中的典型三葉草結(jié)構(gòu)。此外，所有真核生物類型的tRNA中都存在第58位的m1A（m1A58），這可能意味著它對(duì)分子結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性至關(guān)重要。盡管1-甲基腺苷已被鑒定為早期惡性疾病的標(biāo)志物，但其作為修飾核苷的完整作用尚未被闡明。

艾美捷1-甲基腺苷(m1A)ELISA試劑盒（#MET-5099）是一種競(jìng)爭(zhēng)性酶免疫分析方法，用于快速檢測(cè)和定量尿液、血清或血漿樣本中的1-甲基腺苷。通過(guò)將未知樣本中的1-甲基腺苷吸光度與已知1-甲基腺苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸光度進(jìn)行比較，來(lái)確定未知樣本中1-甲基腺苷的含量。該試劑盒對(duì)1-甲基腺苷的檢測(cè)靈敏度約為2納克/毫升。每套試劑盒提供的試劑足以進(jìn)行多達(dá)96次測(cè)定，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線和未知樣本。

測(cè)定原理：

1-甲基腺苷（m1A）ELISA試劑盒是一種競(jìng)爭(zhēng)性ELISA，用于定量測(cè)量1-甲基腺苷（m1A）。首先將未知的1-甲基腺苷樣本或1-甲基腺苷標(biāo)準(zhǔn)品加入預(yù)先吸附了1-甲基腺苷-牛血清白蛋白（BSA）偶聯(lián)物的微孔板中。經(jīng)過(guò)短暫孵育后，加入抗1-甲基腺苷單克隆抗體，隨后加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的二抗。通過(guò)與預(yù)設(shè)的1-甲基腺苷標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，確定未知樣本中的1-甲基腺苷含量。

相關(guān)產(chǎn)品：

1. MET-5097：N6-甲基腺苷（m6A）ELISA試劑盒

2. STA-320：OxiSelect?氧化DNA損傷ELISA試劑盒（8-OHdG定量）

3. STA-321：OxiSelect? DNA雙鏈斷裂（DSB）染色試劑盒

4. STA-322：OxiSelect?紫外線誘導(dǎo)DNA損傷ELISA試劑盒（CPD定量）

5. STA-323：OxiSelect?紫外線誘導(dǎo)DNA損傷ELISA試劑盒（6-4PP定量）

1-甲基腺苷(m1A)ELISA試劑盒組成：

盒子1（室溫運(yùn)輸）

1. 96孔蛋白結(jié)合板（編號(hào)231001）：一個(gè)96孔條板。

2. 抗1-甲基腺苷抗體（編號(hào)50991C）：一個(gè)10微升裝的抗1-甲基腺苷抗體小瓶。

3. 二抗，HRP偶聯(lián)物（1000倍）（編號(hào)230003）：一個(gè)20微升裝的小瓶。

4. 測(cè)定稀釋液（編號(hào)310804）：一個(gè)50毫升瓶。

5. 10倍洗滌緩沖液（編號(hào)310806）：一個(gè)100毫升瓶。

6. 底物溶液（編號(hào)310807）：一個(gè)12毫升琥珀色瓶。

7. 終止液（編號(hào)310808）：一個(gè)12毫升瓶。

8. 1-甲基腺苷標(biāo)準(zhǔn)品（編號(hào)50992C）：一個(gè)10微升裝的5毫克/毫升1-甲基腺苷（溶于DMSO）小瓶。

盒子2（藍(lán)冰運(yùn)輸）

1. 1-甲基腺苷偶聯(lián)物（1000倍）（部件編號(hào)50993D）：一個(gè)10微升裝的1-甲基腺苷-BSA偶聯(lián)物（溶于PBS）小瓶。

未提供的材料：

1. 1-甲基腺苷樣本，如尿液、血清、血漿或從細(xì)胞或組織中提取的RNA

2. RNA提取試劑盒、核酸酶P1、堿性磷酸酶

3. pH 5.2的醋酸鈉；pH 7.5的Tris緩沖液

4. 10 kDa分子量截止（MWCO）離心過(guò)濾器（例如Amicon Ultra 0.5毫升）

儲(chǔ)存條件：

收到后，將抗1-甲基腺苷抗體和1-甲基腺苷標(biāo)準(zhǔn)品分裝并儲(chǔ)存于-20攝氏度，1-甲基腺苷偶聯(lián)物（1000倍）儲(chǔ)存于-80攝氏度，以避免反復(fù)凍融。將所有其他組分儲(chǔ)存于4攝氏度。

結(jié)果示例：

下圖展示了典型的1-甲基腺苷ELISA結(jié)果。以下數(shù)據(jù)僅供參考，不應(yīng)用于解釋實(shí)際結(jié)果。

圖上：1-甲基腺苷ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖下：人尿液、血漿和血清中的1-甲基腺苷水平。根據(jù)測(cè)定協(xié)議說(shuō)明測(cè)試未稀釋的人類樣本。

1-甲基腺苷(m1A)ELISA試劑盒文獻(xiàn)參考：

1. Borek, E., et al. (1977) Cancer Res. 37: 3362-3366.

2. Chen, W., et al. (2016) Sci Rep. 6: 31080.

3. Davis, G.E., et al. (1977) Clin. Chem. 23: 1427-1435.

4. Dominissini, D., et al. (2016) Nature 530: 441-446.

5. Macon, J.B., et al. (1968) Biochemistry 7(10): 3453-3458.

6. Seidel, A., et al. (2006) Br. J. Cancer 94: 1726-1733.