旋轉(zhuǎn)柱膜蛋白折疊試劑盒是專為使用旋轉(zhuǎn)柱從包涵體折疊膜蛋白而設(shè)計的。旋轉(zhuǎn)柱膜蛋白折疊篩選試劑盒（MFC01 - 20）包含20個蛋白質(zhì)折疊旋轉(zhuǎn)柱，代表20種不同的條件，含有各種去污劑和脂質(zhì)，可形成膠束或雙層膠束。這種膠束或雙層膠束環(huán)境有助于折疊受體、離子通道和其他膜蛋白。篩選試劑盒中的折疊蛋白樣品用于SDS - PAGE和活性測試。根據(jù)測試結(jié)果，選擇最佳條件（即柱編號）用于制備性折疊。對于膜蛋白的規(guī)模化折疊，請使用大規(guī)模制備性膜蛋白折疊柱套裝（MFC01至MFC20）。

每個旋轉(zhuǎn)柱膜蛋白折疊篩選試劑盒包含160微升試劑A、160微升試劑B、1.1毫升試劑C以及20個預(yù)裝填的旋轉(zhuǎn)柱，用于20種不同的蛋白質(zhì)折疊條件。

每個小規(guī)模制備性膜蛋白折疊柱套裝#1至#20包含用于柱#1至10的160微升試劑A或用于柱#11至20的試劑B、1.1毫升試劑C以及10個相同的預(yù)裝填旋轉(zhuǎn)柱，這些旋轉(zhuǎn)柱是篩選試劑盒中20種條件中選定的折疊條件。

艾美捷ProFoldin-離心柱膜蛋白折疊篩選試劑盒：

代碼：MFC01-20

組成：旋轉(zhuǎn)柱膜蛋白折疊篩套件 #MFC01-20

小型制備膜蛋白折疊柱組#1至#20  #MFC01S至MFC20S

蛋白質(zhì)折疊操作步驟：

請參閱包涵體制備的協(xié)議。蛋白質(zhì)濃度約為2 - 5毫克/毫升。

樣品準備：為柱#1至10準備裝載樣品A，為柱#11至20準備裝載樣品B。要準備裝載樣品A，將130微升溶解的包涵體與130微升試劑A混合。要制備裝載樣品B，將130微升溶解的包涵體與130微升試劑B混合。

柱準備：使用臺式微量離心機將柱以3200轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心30秒。取下柱底部的尖端和蓋子。將柱放入1.5毫升微量離心管中。將柱以1400轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心2分鐘，然后將每個柱轉(zhuǎn)移到一個干凈的標記好的1.5毫升微量離心管中。

蛋白質(zhì)折疊：將25微升裝載樣品A加載到#1至10的每個柱上；將25微升裝載樣品B加載到#11至20的每個柱上。將柱以3200轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心4分鐘。丟棄柱，將洗脫液在4℃下孵育2小時。然后向每個洗脫液中加入50微升試劑C，并將溶液在4℃下孵育過夜。將溶液以14000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心5分鐘，并收集上清液進行分析。

折疊產(chǎn)物分析：

SDS - PAGE ：使用SDS - PAGE檢查每種折疊條件下的蛋白質(zhì)溶解度。要制備SDS - PAGE樣品，將每個柱中的10微升折疊產(chǎn)物與10微升水和7微升4倍SDS - PAGE上樣緩沖液混合。

活性測試 ：使用活性測定（催化或結(jié)合活性）來檢查蛋白質(zhì)活性。在測定中將折疊產(chǎn)物稀釋10到20倍。例如，如果測定反應(yīng)體積為100微升，則在每次反應(yīng)中加入5到10微升的折疊產(chǎn)物。測定緩沖液中可能包含1毫摩爾十二烷基麥芽糖苷作為去污劑。

注意 ：如果沒有可用的活性測定，色譜行為可以用作蛋白質(zhì)折疊狀態(tài)的指標。折疊良好的膜蛋白可以在含有適當去污劑（例如，1毫摩爾十二烷基麥芽糖苷）的緩沖液中進行純化。CD或SEC - MALS分析僅適用于純化的蛋白質(zhì)樣品。

包涵體溶解 ：

估計純化包涵體中的蛋白質(zhì)含量。加入溶解緩沖液（20毫摩爾Tris - HCl，pH 8.0，8摩爾尿素，10毫摩爾DTT）的體積，使蛋白質(zhì)濃度約為10毫克/毫升。通過在室溫下用溶解緩沖液攪拌包涵體2到4小時來完成溶解。大部分沉淀應(yīng)被溶解。

將溶解材料以30000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心45分鐘。保留上清液作為溶解的包涵體。

ProFoldin-離心柱膜蛋白折疊篩選試劑盒相關(guān)產(chǎn)品：

膜蛋白 ：

大規(guī)模制備性膜蛋白折疊柱套裝 MFC01至MFC20

稀釋膜蛋白折疊篩選試劑盒 MPS10 - 20

可溶性蛋白 ：

旋轉(zhuǎn)柱蛋白質(zhì)折疊篩選試劑盒 SFC01 - 10

96孔蛋白質(zhì)折疊板 PFS096

ProFoldin專注于蛋白質(zhì)科學(xué)領(lǐng)域的研究與開發(fā)。ProFoldin提供一系列與蛋白研究相關(guān)的產(chǎn)品和服務(wù)，包括蛋白除鹽、蛋白折疊、膜蛋白提取、聚合酶、高通量檢測試劑和熒光染料等。其中蛋白折疊柱和試劑、膜蛋白提取試劑盒為特色產(chǎn)品，成為了廣大科研工作者研究蛋白尤其是膜蛋白有力的科研工具。