突破氧化損傷檢測瓶頸！抗8-OHdG抗體（克隆N45.1）IHC標準化操作指南

發布者：艾美捷科技發布時間：2025-08-25

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為何選擇JaICA品牌的N45.1克隆抗8-OHdG抗體？

貨號：MOG-020P/MOG-100P

·高特異性：靶向氧化DNA損傷關鍵標志物8-OHdG/8-oxo-dG

·多場景驗證：兼容福爾馬林/Bouin固定、石蠟/冰凍切片、培養細胞樣本

·權威背書：日本免疫學會認證，實驗方案經多篇SCI論文引用（Biol Pharm Bull, PLoS ONE）

實驗全流程詳解

實驗條件應由每個用戶確定。

階段1：樣本前處理

步驟	操作說明	關鍵參數
固定	新鮮組織用Bouin溶液固定（注：福爾馬林樣本需額外抗原修復）	配方：飽和苦味酸:甲醛:乙酸:H₂O=15:5:1:10 時間：過夜
脫蠟	石蠟包埋樣本處理	試劑：二甲苯→梯度乙醇目的：完全去除石蠟
抗原修復 (僅福爾馬林樣本)	微波法： ① 載玻片浸入10mM檸檬酸鹽緩沖液(pH6.0) ② 煮沸5分鐘 ③ 自然冷卻60分鐘高壓滅菌法：	溫度/時間：微波：持續沸騰高壓：121°C/10分鐘注意：防止樣本脫落！

階段2：封閉與抗體孵育

步驟	操作說明	關鍵參數
封閉	涂布同源物種正常血清（例：二抗為兔抗小鼠IgG→用正常兔血清）	濃度：1:75稀釋目的：阻斷二抗非特異性結合小鼠樣本必加：MOM試劑封閉內源IgG
一抗孵育	滴加抗8-OHdG單抗(克隆N45.1)	濃度：1-10ug/mL 條件：4°C過夜
二抗孵育	滴加生物素標記兔抗小鼠IgG	濃度：1:300稀釋時間/溫度：室溫40分鐘

階段3：信號檢測

關鍵注意事項

1. 固定方式決定流程

(1) + Bouin固定樣本：無需抗原修復

(2) - 福爾馬林樣本：必須微波/高壓修復

2. 抗體濃度動態優化

正常細胞基線水平低（10??/dG），建議預實驗測試梯度濃度（1/5/10μg/mL）

3. 內源干擾封閉方案

高背景組織（腎/肝/腸）：

0.001% Avidin/PBS孵育10-15min → PBS洗 → 0.001% Biotin/PBS孵育10-15min → PBS洗

4. 顯色系統選擇

禁用HRP系統（H?O?產生假陽性）

強制使用AP系統（BCIP/NBT底物）

結果判讀與驗證