想必各位實(shí)驗(yàn)達(dá)人對(duì)于免疫組化（IHC）和免疫熒光（IF）應(yīng)該都比較熟悉了，在做免疫組化（IHC）或是免疫熒光（IF）實(shí)驗(yàn)過程中，高背景是我們經(jīng)常遇見的問題，有的時(shí)候盡管我們進(jìn)行了封閉操作，背景依舊居高不下。想當(dāng)年我也曾經(jīng)就被免疫熒光背景問題帶來的恐懼深深支配過，別人做的免疫熒光的結(jié)果是這樣的：

      我按照同樣的步驟做的免疫熒光，只是沒有染色DAPI，結(jié)果是這樣的：

      我的細(xì)胞你在哪？（是不是上帝在我眼前遮住了臉，忘了掀開）

      直到某天我在艾美捷官網(wǎng)上瀏覽到關(guān)于IF實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生背景的原因及降低背景的常用方法：

       IF降低背景：

       高背景是免疫熒光常見的問題，解決此問題可以用二抗來源的正常血清代替 BSA 做封閉液，降低抗體濃度，增加洗滌次數(shù)，洗滌至少三次，每次五分鐘，推薦洗滌液為 PBS+0.05% Tween。

      我們實(shí)驗(yàn)室之前大多數(shù)都是使用BSA進(jìn)行封閉，用正常血清代替BSA進(jìn)行封閉倒是第一次聽說，血清真的有如此奇效，我迫不及待的趕緊去嘗試了一番，熒光背景確實(shí)顯著降低了。

       什么是封閉血清（Blocking Serum=Normal Serum）？

      封閉血清是將飼養(yǎng)的非免疫的一切正常小動(dòng)物取血，隨后不用抗凝劑，凝血機(jī)制，血團(tuán)收攏，溶解的淺黃色液體。歷經(jīng)獨(dú)特處理工藝后的血清，非常適在各種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中用以封閉解決， 例如：IHC、IF/ICC、ELISA等。

       血清作為封閉劑的原理：

      強(qiáng)烈建議在PBS中稀釋至5％（v / v）的正常血清作為封閉劑，以減少免疫反應(yīng)中非特異性，保守序列和/或Fc受體結(jié)合的背景。用稀釋的正常血清與標(biāo)記抗體來自同一宿主，可獲得最佳結(jié)果，作為添加一級(jí)抗體之前的單獨(dú)孵育步驟。

       用血清進(jìn)行封閉效果好嗎？

      封閉血清適用于免疫組化或者免疫熒光實(shí)驗(yàn)中樣本的封閉，可以封閉待檢樣本中與蛋白質(zhì)非特異性結(jié)合的位點(diǎn)，另外還可以封閉樣品中內(nèi)源性的Fc片段結(jié)合位點(diǎn)，阻斷抗體與樣品中的Fc受體結(jié)合，從而降低背景，減少假陽性。對(duì)于適用多抗的實(shí)驗(yàn)，選擇二抗種屬來源的正常血清是封閉處理的金標(biāo)準(zhǔn)。

       封閉血清如何使用？

      推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在組織切片或者細(xì)胞涂片上，37℃度孵育10-30min（或者室溫1h），清除血清，不用洗滌，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃過夜。

通過上面對(duì)封閉血清的介紹，您是不是有一種想立刻動(dòng)手試一試的沖動(dòng)呢? 心動(dòng)不如行動(dòng)，快來動(dòng)手試一試吧，看看小艾給您介紹的降低背景小技巧對(duì)您的實(shí)驗(yàn)有沒有幫助，相信您也可以做出漂亮的圖片!

       封閉血清推薦：

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