DNA甲基化是最廣泛研究的表觀遺傳修飾，涉及在胞嘧啶堿基的第5位添加甲基基團(tuán)，生成5-甲基胞嘧啶（5-mC）。此外，從5-甲基胞嘧啶衍生的其他修飾胞嘧啶核苷酸，包括5-羥甲基胞嘧啶（5-hmC）、5-醛基胞嘧啶（5-fC）和5-羧基胞嘧啶（5-caC）已被發(fā)現(xiàn)，并作為活性DNA去甲基化途徑的一部分以及可能的表觀遺傳標(biāo)記進(jìn)行研究。這些修飾的胞嘧啶是由TET（Ten-eleven translocation）雙加氧酶家族成員對(duì)5-mC進(jìn)行氧化生成的。5-羥甲基胞嘧啶是通過5-甲基胞嘧啶的氧化生成的；5-醛基胞嘧啶和5-羧基胞嘧啶則是從5-hmC進(jìn)一步生成的，也可以直接從5-mC生成。為了推動(dòng)DNA甲基化和去甲基化研究，EpiGentek提供了一系列用于研究5-mC及其衍生胞嘧啶的產(chǎn)品。

1. 甲基胞嘧啶（5-mC）

5-甲基胞嘧啶（5-mC）是通過在胞嘧啶堿基的第5位添加甲基基團(tuán)生成的，是研究最多的表觀遺傳修飾。DNA甲基化通常會(huì)抑制基因表達(dá)，并一直是研究的熱點(diǎn)。它由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）催化，通常發(fā)生在CpG二核苷酸位點(diǎn)，盡管在植物和胚胎干細(xì)胞中也報(bào)道了CpA和CpT位點(diǎn)的非CpG甲基化。在正常體細(xì)胞中，大約60%-80%的CpG位點(diǎn)是甲基化的。基因組中某些區(qū)域富含CpG二核苷酸，尤其是基因啟動(dòng)子區(qū)域，這些CpG密集區(qū)域被稱為CpG島。它們通常是未甲基化的，從而允許轉(zhuǎn)錄激活和基因表達(dá)。異常甲基化被認(rèn)為在多種疾病的發(fā)病機(jī)制和進(jìn)展中起作用，包括癌癥。癌癥的特征是整體低甲基化，但在某些基因啟動(dòng)子上出現(xiàn)高甲基化，導(dǎo)致許多腫瘤抑制基因的沉默和抑制。

1.1 甲基胞嘧啶（5-mC）定量檢測(cè)

研究人員通常會(huì)從檢測(cè)樣本中5-甲基胞嘧啶（5-mC）的全局水平開始他們的DNA甲基化研究。為此，EpiGentek提供了DNA甲基化（5-mC）整體水平定量檢測(cè)試劑盒，貨號(hào)P-1030。該試劑盒利用特異性5-mC抗體，能夠檢測(cè)來自多種物種的片段化以及完整DNA中的5-mC。這種快速簡(jiǎn)便的一步ELISA法僅需少量DNA即可完成檢測(cè)，其結(jié)果與高效液相色譜（HPLC）方法獲得的結(jié)果高度一致，但成本更低、通量更高。

1.2 基因特異性的DNA甲基化研究——基于亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化方法

對(duì)于基因特異性的DNA甲基化研究，金標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)是亞硫酸氫鹽測(cè)序，該技術(shù)結(jié)合了DNA的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化和測(cè)序。通過亞硫酸氫鈉處理DNA，未甲基化的胞嘧啶會(huì)被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶則對(duì)亞硫酸氫鈉處理具有抵抗力，仍保持為胞嘧啶。這使得在測(cè)序過程中可以區(qū)分胞嘧啶的甲基化狀態(tài)，因?yàn)槲醇谆陌奏?huì)被讀作胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶則會(huì)被讀作胞嘧啶。為此，EpiGentek提供了DNA甲基化修飾試劑盒, 貨號(hào)P-1001，適用于從極少量DNA（低至50皮克）開始的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化。獨(dú)特的試劑和實(shí)驗(yàn)流程可實(shí)現(xiàn)極高的轉(zhuǎn)化率，并最大限度地減少DNA降解，從而避免DNA損失。亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化可以與其他下游應(yīng)用相結(jié)合，包括定量PCR（甲基化特異性PCR），為此，EpiGentek還提供了MS-qPCR快速試劑盒，貨號(hào)P-1028，可用于對(duì)亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化后的DNA進(jìn)行qPCR檢測(cè)。

1.3 基因特異性的DNA甲基化研究——基于甲基化DNA免疫沉淀（MeDIP）

在基因特異性甲基化研究中使用的其他方法還包括親和富集方法，用于分離甲基化DNA。為此，EpiGentek提供了MeDIP超敏試劑盒，貨號(hào)P-1052，用于進(jìn)行甲基化DNA免疫沉淀（MeDIP）。該試劑盒使用高特異性的抗體從單鏈或雙鏈DNA片段中免疫沉淀5-甲基胞嘧啶（5-mC），并且每次反應(yīng)只需50納克DNA即可進(jìn)行檢測(cè)。EpiGentek還提供了EpiQuik組織甲基化DNA免疫沉淀試劑盒，貨號(hào)P-2020，該試劑盒包含從哺乳動(dòng)物組織中直接進(jìn)行MeDIP所需的所有緩沖液和試劑。

除了通過5-mC抗體進(jìn)行免疫沉淀和富集的方法外，還可以使用甲基-CpG結(jié)合域蛋白（MBD）與5-mC結(jié)合。MBD蛋白優(yōu)先在CpG二核苷酸處結(jié)合甲基化DNA，EpiGentek提供了兩種基于MBD2特異性抗體的甲基化DNA染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）試劑盒。MBD2 ChIP試劑盒，貨號(hào)P-2017和組織MBD2 ChIP試劑盒，貨號(hào)P-2018， 分別適用于細(xì)胞和組織樣本。使用這些MeDIP和MBD2 ChIP試劑盒富集的甲基化DNA可用于多種下游應(yīng)用分析，包括微陣列、PCR和測(cè)序。

EpiGentek還為研究DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）的研究人員提供了多種產(chǎn)品，DNMTs是負(fù)責(zé)將甲基基團(tuán)添加到胞嘧啶上的酶。研究人員可以使用DNMT活性/抑制性檢測(cè)試劑盒(貨號(hào)P-3139)進(jìn)行DNMT活性或抑制研究。通過該試劑盒，可以定量測(cè)量核提取物或純化DNMTs中總DNMTs（DNMT1、DNMT3A和DNMT3B）的活性變化。這有助于比較經(jīng)DNMT抑制劑處理的細(xì)胞與未處理細(xì)胞中DNMTs的活性水平，以及在酶學(xué)研究中測(cè)量DNMT活性，其高通量格式能夠輕松快速地對(duì)多個(gè)樣本進(jìn)行檢測(cè)。此外，EpiGentek還提供了一系列DNMT檢測(cè)試劑盒，用于定量檢測(cè)細(xì)胞或組織核提取物中，或純化DNMT制劑中的DNMT1(貨號(hào)P-3011)、DNMT3A（貨號(hào)P-3012）和DNMT3B（貨號(hào)P-3013）蛋白含量。

   在其他DNA甲基化研究中，EpiGentek還提供了5-甲基胞嘧啶單克隆抗體（貨號(hào)A-1014），該抗體可檢測(cè)來自廣泛物種的5-mC，并適用于在MeDIP研究中富集5-mC、免疫組化（IHC）染色以及用于ELISA檢測(cè)等多種應(yīng)用。

2. 5-羥甲基胞嘧啶(5-hmC)

5-羥甲基胞嘧啶（5-hmC）是TET酶氧化5-甲基胞嘧啶（5-mC）的產(chǎn)物，也是活性DNA去甲基化途徑中的第一個(gè)衍生物。與通常與基因抑制相關(guān)的5-mC不同，5-hmC通常與基因激活和表達(dá)相關(guān)。其最高水平出現(xiàn)在成年大腦中，尤其是在基因編碼區(qū)域富集；而在胚胎干細(xì)胞中，5-hmC與啟動(dòng)子和其他基因調(diào)控區(qū)域相關(guān)。在多種癌癥中，5-hmC水平較低，因此被提議作為可能的診斷標(biāo)志物。

為了測(cè)量5-hmC的全局水平，EpiGentek提供了整體水平DNA羥甲基化（5-hmC）定量檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)P-1032）。通過這種一步ELISA法，可以使用從多種物種的細(xì)胞、組織、血漿或血清中分離的DNA來測(cè)量5-hmC的全局水平。這是一種高度特異性和靈敏的檢測(cè)方法，能夠檢測(cè)到低至0.01%的羥甲基化DNA，且與5-mC或未甲基化的胞嘧啶無交叉反應(yīng)。

2.1 基因特異性的羥甲基化DNA研究——基于羥甲基化DNA免疫沉淀（hMeDIP）

對(duì)于基因特異性的羥甲基化DNA測(cè)量，EpiGentek提供了羥甲基化DNA免疫沉淀（hMeDIP）試劑盒。該試劑盒使用高度特異性的5-hmC抗體，可以從任何物種的DNA中富集5-hmC，并且富集后的5-hmC可以通過多種下游應(yīng)用進(jìn)行分析，包括PCR、微陣列或下一代測(cè)序（NGS）。

為了檢測(cè)TET酶的酶活性——TET酶是將5-mC轉(zhuǎn)化為5-hmC的酶，在DNA去甲基化研究中，EpiGentek提供了5mC-羥化酶TET活性/抑制試劑盒，貨號(hào)P-3086。通過該試劑盒，可以在核提取物或純化的TET酶制劑中測(cè)量總TET酶的活性或抑制情況。此外，EpiGentek還提供TET1多克隆抗體，可用于5-hmC免疫沉淀和Western Blot（WB）。其他兩種TET家族成員TET2和TET3的抗體也適用于免疫組化（IHC）、WB和ELISA。

此外，還可以使用5-羥甲基胞嘧啶（5-hmC）單克隆抗體（貨號(hào)A-1018）進(jìn)行其他5-hmC表觀遺傳學(xué)研究，該抗體適用于通過hMeDIP富集羥甲基化DNA、IHC染色以及通過ELISA檢測(cè)5-hmC等多種應(yīng)用。這種抗體在廣泛物種中表現(xiàn)出色。

3. 5-甲酰基胞嘧啶(5-fC)

5-甲酰基胞嘧啶（5-fC）是由TET家族成員在DNA去甲基化過程中氧化5-甲基胞嘧啶（5-mC）或5-羥甲基胞嘧啶（5-hmC）產(chǎn)生的。5-fC在胚胎干細(xì)胞中富集于活躍轉(zhuǎn)錄基因的啟動(dòng)子區(qū)域，以及增強(qiáng)子和其他基因調(diào)控區(qū)域。在DNA去甲基化過程中，5-fC可以通過涉及胸腺嘧啶DNA糖基化酶（TDG）的機(jī)制被轉(zhuǎn)化為未修飾的胞嘧啶，隨后通過堿基切除修復(fù)完成。

為了您的5-fC表觀遺傳學(xué)研究，EpiGentek提供了5-甲酰基胞嘧啶（5-fC）DNA定量試劑盒（貨號(hào)P-1041），用于測(cè)量5-fC的全局水平。該試劑盒適用于所有物種的細(xì)胞、組織和體液中的DNA。這種快速簡(jiǎn)便的比色法檢測(cè)僅需使用酶標(biāo)儀，最低可檢測(cè)到1皮克的5-fC。它已成功用于小鼠和人腦組織以及癌組織中5-fC的定量檢測(cè)。對(duì)于涉及胸腺嘧啶DNA糖基化酶的研究，該酶在5-fC轉(zhuǎn)化為未修飾胞嘧啶的過程中切除5-fC，研究人員可以使用胸腺嘧啶DNA糖基化酶（TDG）活性/抑制試劑盒（貨號(hào)P-3094）。這種基于ELISA的試劑盒可以直接測(cè)量核提取物或純TDG酶制劑中的TDG活性或抑制情況，無需耗時(shí)的電泳和色譜法。

4. 5-羧基胞嘧啶(5-caC)

6-羧基胞嘧啶（5-caC）是DNA去甲基化過程中產(chǎn)生的最后一個(gè)胞嘧啶衍生物。它是通過5-羥甲基胞嘧啶（5-hmC）的連續(xù)氧化生成的，先轉(zhuǎn)化為5-醛基胞嘧啶（5-fC），再轉(zhuǎn)化為5-caC；也可以直接從5-甲基胞嘧啶（5-mC）生成。與5-fC類似，5-caC在胚胎干細(xì)胞中富集于活躍轉(zhuǎn)錄基因的啟動(dòng)子區(qū)域，并且也可以被轉(zhuǎn)化為未修飾的胞嘧啶。某些癌癥類型中5-caC的水平有所增加。

上述突出介紹的產(chǎn)品只是可用于DNA甲基化和去甲基化研究的產(chǎn)品中的一部分。此外，為了幫助研究人員在表觀遺傳學(xué)研究中節(jié)省時(shí)間的同時(shí)仍能獲得出色的結(jié)果，EpiGentek還提供多種DNA甲基化和染色質(zhì)分析的全流程服務(wù)，包括亞硫酸氫鹽測(cè)序、甲基化DNA免疫沉淀測(cè)序（meDIP-Seq）、羥甲基化DNA免疫沉淀測(cè)序（hmeDIP-Seq）、染色質(zhì)免疫沉淀測(cè)序（ChIP-Seq）以及甲基化特異性PCR（MS-PCR）。