DNA損傷是細(xì)胞基因組不穩(wěn)定的核心誘因，與癌癥發(fā)生、衰老及遺傳性疾病密切相關(guān)。當(dāng)細(xì)胞暴露于輻射、化療藥物或環(huán)境毒素時(shí)，DNA雙鏈斷裂（DSB）是最致命的損傷類型，可導(dǎo)致染色體畸變和細(xì)胞凋亡。研究DNA損傷的修復(fù)機(jī)制對(duì)理解腫瘤耐藥性、開發(fā)靶向療法至關(guān)重要。例如，肺癌患者中DNA損傷修復(fù)（DDR）基因突變顯著影響預(yù)后和靶向治療響應(yīng)[39]，而放療的療效直接依賴于細(xì)胞對(duì)DSB的修復(fù)能力。

γH2AX（磷酸化組蛋白H2AX）是DSB的最早期、最特異的分子標(biāo)志物。DSB激活A(yù)TM/ATR激酶，觸發(fā)H2AX絲氨酸139位點(diǎn)（Ser139）磷酸化，形成γH2AX焦點(diǎn)（foci），每個(gè)焦點(diǎn)對(duì)應(yīng)一個(gè)DSB位點(diǎn)。γH2AX焦點(diǎn)數(shù)量與DSB嚴(yán)重程度正相關(guān)，可量化評(píng)估放療/化療的基因毒性。在三維肺上皮模型中，γH2AX持續(xù)存在提示修復(fù)失敗，導(dǎo)致染色體斷裂和癌變風(fēng)險(xiǎn)。

Epigentek提供的原位 DNA 損傷檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)P-6001），可用于通過(guò)原位檢測(cè) H2AXSer139 磷酸化來(lái)判斷 DNA 損傷或細(xì)胞凋亡。該試劑盒為即用型，能夠特異性地在培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞中通過(guò)檢測(cè)磷酸化 H2AXSer139 來(lái)原位測(cè)定 DNA 損傷。檢測(cè)原理：在該實(shí)驗(yàn)中，貼壁細(xì)胞首先被接種于常規(guī) 96 孔板中培養(yǎng)；接受實(shí)驗(yàn)處理后，細(xì)胞經(jīng)固定與透膜處理。隨后，利用抗磷酸化 H2AXSer139 抗體檢測(cè) DNA 損傷的敏感標(biāo)志物——H2AX 第 139 位絲氨酸的磷酸化水平。通過(guò) HRP 標(biāo)記的二抗顯色系統(tǒng)即可定量磷酸化 H2AXSer139 的比例或總量，顯色強(qiáng)度與 DNA 損傷程度成正比。

原位 DNA 損傷檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)P-6001）核心優(yōu)勢(shì)：

1. 原位保留空間信息：無(wú)需細(xì)胞裂解，直接檢測(cè)孔板內(nèi)細(xì)胞，避免修復(fù)蛋白定位丟失。

2. 高通量 & 快速：3小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，適配96孔板自動(dòng)化平臺(tái)。

3. 無(wú)需復(fù)雜設(shè)備：僅需酶標(biāo)儀，無(wú)需流式細(xì)胞儀或顯微成像。

DNA 損傷檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)P-6001）應(yīng)用場(chǎng)景：

文獻(xiàn)案例：黑色素瘤放療-化療協(xié)同機(jī)制研究

文獻(xiàn)標(biāo)題：Synergetic effect of high dose rate radiations and paclitaxel selectively eliminates melanoma cells (Int. J. Mol. Sci., 2022)

研究設(shè)計(jì)：

模型：黑色素瘤細(xì)胞系暴露于高劑量率X射線（10 MV, 2400 MU/min） + 紫杉醇。

試劑盒：原位 DNA 損傷檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)P-6001）

流程：

1.細(xì)胞輻照后1小時(shí)固定，原位檢測(cè)γH2AX。

2.比色法（450 nm）定量DSB水平。

結(jié)論：高劑量輻射聯(lián)合紫杉醇顯著提升γH2AX表達(dá)（較單一處理高3.2倍），證實(shí)協(xié)同誘導(dǎo)DSB。

Epigentek的EpiQuik In Situ DNA Damage Assay Kit（貨號(hào)P-6001）以γH2AX為分子燈塔，為DNA損傷研究提供快速、精準(zhǔn)、可量化的解決方案。無(wú)論是探索癌癥治療新策略，還是評(píng)估環(huán)境毒性，它都是解鎖基因組穩(wěn)定性研究的鑰匙！