SiR-actin 是基于硅羅丹明（SiR）熒光團和肌動蛋白結(jié)合天然產(chǎn)物海兔素（jasplakinolide）的化合物。SiR-actin 能夠在活細胞中特異性地標記 F-肌動蛋白，并且背景信號極低。SiR-actin 的關鍵特性包括：i）遠紅光吸收和發(fā)射波長；ii）細胞通透性；iii）熒光特性；iv）與超分辨率顯微鏡（STED 和 SIM）兼容。這些特性在一個單一探針中的獨特組合，使 SiR-actin 處于卓越的前沿。

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SiR-肌動蛋白試劑盒

物理性質(zhì)

吸收波長：652 nm

發(fā)射波長：674 nm

最大摩爾吸光系數(shù)：1.0×10⁵ mol^-1·cm^-1

分子量：1241.6 g/mol

分子式：C71H88N8O10Si

試劑盒內(nèi)容：50 nmol SiR-actin 和 1 umol 維拉帕米

儲存與操作

收到試劑后，應將化合物保存在 -20°C 以下。使用無水 DMSO 配制化合物溶液。使用后，將溶液保存在 -20°C 以下。在打開小瓶之前，應讓其升溫至室溫。如果儲存得當，化合物應可穩(wěn)定數(shù)月。注意：DMSO 溶液應特別小心處理，因為 DMSO 會促進有機分子進入組織。請按照所有相關當?shù)胤ㄒ?guī)處理這些試劑。

標記協(xié)議

注意：本協(xié)議是使用粘附在蓋玻片上的人類成纖維細胞優(yōu)化的，并已在其他常見細胞系中得到驗證。實驗協(xié)議的建議應作為起點，每種細胞類型的最優(yōu)標記條件應通過實驗確定。SiR-actin 基于穩(wěn)定肌動蛋白的藥物海兔素，因此可以在活細胞中改變肌動蛋白的動態(tài)。盡管在高達 3 uM 的 SiR-actin 濃度下，有絲分裂時間保持不變，但在培養(yǎng)的 HeLa 細胞中，超過 100 nM 的濃度會導致細胞增殖指數(shù)降低。如果計劃進行長期成像實驗且肌動蛋白動態(tài)至關重要，我們建議將 SiR-actin 的濃度保持在 100 nM 或以下。對于其他用途，建議使用 1 uM 的 SiR-actin 進行染色。

制備 1 mM 儲備液：將 SiR-actin 小瓶的內(nèi)容物溶解在 50 uL 無水 DMSO 中，制成 1 mM 儲備液。該溶液應保存在 -20°C 或以下。不要將溶液分成小份，因為它們會更快降解，且該化合物不會因多次凍融循環(huán)而改變。如果儲存得當，該儲備液應可穩(wěn)定三個月或更長時間。如果需要準確測定儲備液的濃度，將 1 uL 1 mM 儲備液稀釋在 99 uL 含 0.2% SDS 的 PBS 中。在室溫下靜置 15 分鐘后，測量 652 nm 處的吸光度。使用上述摩爾吸光系數(shù)計算濃度。

制備染色液：將 SiR-actin 稀釋到所需濃度的細胞培養(yǎng)基（例如 DMEM + 10% 胎牛血清）中，并短暫渦旋。由于染色效率可能取決于細胞系，建議首次嘗試使用 1 uM 的濃度進行染色，以快速獲得強染色效果，然后在后續(xù)實驗中降低 SiR-actin 的濃度，直到獲得最佳染色效果（見下表標記濃度和孵育時間）。某些細胞系可能表達高水平的外排泵，對 SiR-actin 染色效果不佳。在染色液中加入 10 uM 的維拉帕米（一種廣譜外排泵抑制劑）通常可以顯著改善染色效果。有關維拉帕米與 SiR 探針配合使用的

Spirochrome 成立于 2015年，總部位于瑞士，是一家專注于活細胞熒光成像技術的生物科技公司。公司核心技術源于國際權威學術期刊《Nature Chemistry》與《Nature Methods》發(fā)表的兩項創(chuàng)新研究成果—— SIR與SPY熒光母核。該類染料具有卓越的穩(wěn)定性、超高熒光信號與極低背景噪聲，能夠突破傳統(tǒng)成像限制，適用于多種超分辨熒光成像技術， 助力科學家開啟活細胞微觀世界的分子尺度探索時代。

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