UbiTest試劑盒用于確定目標(biāo)蛋白是否被多泛素化。這一強(qiáng)大的平臺(tái)改進(jìn)了研究蛋白質(zhì)泛素化最常用的方法：免疫沉淀和Western blot分析。然而，在免疫印跡步驟中，底物抗體常常與底物的多泛素化形式相互作用不同。這是由于表位遮蔽、親和力降低或選擇性變化所導(dǎo)致的。一種更明確的證明蛋白質(zhì)泛素化的方法是，在免疫印跡分析之前，將免疫沉淀與廣譜去泛素化酶（DUB）消化相結(jié)合。經(jīng)過(guò)DUB處理后，目標(biāo)蛋白（POI）的信號(hào)增加，這清楚地表明該蛋白已被泛素化，即使在未處理的樣本中沒(méi)有明顯的反應(yīng)性也是如此。為了避免由于POI免疫反應(yīng)性變化而可能產(chǎn)生的問(wèn)題，UbiTest檢測(cè)利用TUBEs來(lái)下拉多泛素化蛋白。TUBEs（串聯(lián)泛素結(jié)合實(shí)體）是經(jīng)過(guò)工程改造的串聯(lián)泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其對(duì)四泛素的解離常數(shù)在納摩爾范圍內(nèi)。TUBE1已被證明能夠結(jié)合所有8種連接類型。

確定目標(biāo)蛋白上多泛素化的連接類型是具有挑戰(zhàn)性的。傳統(tǒng)方法要么通過(guò)質(zhì)譜（MS），要么使用連接特異性抗體進(jìn)行Western blot。LifeSensors開(kāi)發(fā)了一種更明確的方法，通過(guò)在免疫印跡分析之前使用連接特異性DUB來(lái)證明蛋白質(zhì)的多泛素化連接類型。經(jīng)過(guò)K48/K63特異性DUB處理后，未修飾POI對(duì)應(yīng)的條帶信號(hào)增加，清楚地表明該蛋白被K48/K63多泛素化。

艾美捷[干冰]連接特異性UbiTest-磁珠管洗脫試劑盒#UM-0412M-1000組成：

除了泛選擇性UbiTest磁珠洗脫試劑盒的組分外，該試劑盒還包含：  

K48連接特異性DUB：25 ug，10 uM  

K63連接特異性DUB：35 ug，10 uM  

應(yīng)用：

從細(xì)胞和組織提取物中方便地一步下拉多泛素化蛋白  

分離多泛素化蛋白用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究  

確認(rèn)目標(biāo)蛋白的多泛素化及其連接類型  

真正證明多泛素化——無(wú)需質(zhì)譜  

方便比較處理樣本之間的多泛素化水平  

方便對(duì)多個(gè)POI進(jìn)行篩選  

無(wú)需底物純化