什么情況下會選擇標簽抗體用于免疫沉淀呢？

        當某些目標蛋白沒有對應的特異性抗體（eg.抗體所識別的抗原表位被相互作用蛋白所遮蔽，無法與目的蛋白相互作用或抗體選擇不合適，所選抗體不能識別處于天然構象的蛋白）而無法進行免疫沉淀時，可以采用一個表位標記蛋白后，再選擇針對此表位的標簽抗體來進行免疫沉淀。

       什么樣的標簽適合用于免疫沉淀呢？

        His標簽是由6個組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設計用于重組蛋白質的吸附純化。由于分子量較小，并且較容易分離和純化，His-tag 融合標簽與其他標簽相比有很多明顯優(yōu)勢, 是目前用于純化的融合標簽中使用最為廣泛的一種。His抗體也常用于檢測和His標簽融合表達蛋白的表達、細胞內定位，以及純化、定性或定量檢測His融合表達蛋白等。     

        為什么推薦使用His標簽抗體偶聯的瓊脂糖/磁珠？

        與使用Protein A/G瓊脂糖的傳統(tǒng)免疫沉淀（IP）方法相比，Abbkine的瓊脂糖/磁珠偶聯標簽抗體，省去了Protein A/G與抗原-抗體復合物結合的步驟。偶聯抗體直接和目標蛋白結合后，通過離心或使用磁力架，將目標蛋白從細胞裂解液中分離出來。不僅讓實驗變得簡單快捷，更可以避免非特異性結合，降低背景。表位標記蛋白的免疫沉淀可用于確定蛋白的細胞定位、研究翻譯后修飾或檢測標記蛋白與其它蛋白之間的相互作用。   

•         看到這里，您肯定會問，Protein A/G的缺點是什么？

1.         1.耗時：使用Protein A/G需要額外的孵育與洗滌操作

2.         2.效果差：當抗體種屬、亞型和ProteinA/G不匹配時，ProteinA/G和抗體結合能力弱

3.         3.背景高：和樣本中的其他免疫球蛋白結合，產生非特異性結合，導致高背景。   

       這就是艾美捷科技為您推薦瓊脂糖/磁珠偶聯His標簽抗體的原因：

        瓊脂糖/磁珠偶聯His標簽抗體，優(yōu)勢更加突出：   

•         高特異性—高特異性單克隆標簽抗體可實現高產量和高純度免疫沉淀

•         低背景—穩(wěn)定、預封閉的填料及特異性抗體減少了免疫沉淀過程中的非特異性結合

•         規(guī)格靈活：100ul, 400ul, 2ml，多規(guī)格可供選擇。滿足不同規(guī)模的免疫沉淀需求

•         操作方便—產品說明書提供了免疫沉淀優(yōu)化方案，一次免疫沉淀時間約1 - 2小時

•         兼容性強—填料可以兼容手動及自動化操作

         瓊脂糖/磁珠偶聯His標簽抗體使用說明：

•         * 瓊脂糖微球是多孔的，這使得它們具有高的表面積與蛋白質相互接觸，并可以容納大量的液體。在純化大量蛋白的時候，傳統(tǒng)的瓊脂糖微球偶聯抗體是IP實驗的完美選擇。（瓊脂糖：每個樣品加入20ul懸液）

•         * 在IP實驗中，由于所有的相互作用均發(fā)生在磁珠的外表面，并且磁珠的尺寸更均一，所以磁珠的可重復性和純度通常高于瓊脂糖。磁性分離不需要離心和多次洗滌，且孵育時間短，在日常小規(guī)模、快速處理多個樣品的IP實驗時，磁珠偶聯抗體更簡單、更快速。（磁珠：每個樣品加入10-20ul懸液）

•        * 提供形式：液體（抗體-瓊脂糖/磁珠復合物：保護液=1:1，50%的懸浮液）

•         *  儲存方式：4°C可保存一年，瓊脂糖偶聯標簽抗體避免凍融和渦旋；磁珠偶聯標簽抗體避免凍融和離心

        瓊脂糖/磁珠偶聯His標簽抗體說明書：

        瓊脂糖偶聯His標簽抗體：https://www.abbkine.com/datasheet/A02050AGB.pdf

        磁珠偶聯His標簽抗體： https://www.abbkine.com/datasheet/A02050MGB.pdf

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