Di系列細(xì)胞膜熒光探針想必大家一定不陌生，我們做細(xì)胞膜染色的時候經(jīng)常會用到，今天給大家介紹下常見的4類Di細(xì)胞膜熒光探針：DiI, DiO, DiD 和 DiR，Di系列染料是一類環(huán)境敏感型親脂性膜染料，這類探針在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質(zhì)）結(jié)合時，其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。一旦應(yīng)用于細(xì)胞中，這類染料會在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散，在其最佳濃度條件下，可以擴(kuò)散逐漸使整個細(xì)胞的細(xì)胞膜被染色。

DiI, DiO, DiD 和 DiR被激發(fā)后可以發(fā)出不同顏色的熒光，DiO和磷酯雙層膜結(jié)合后的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考下圖。

DiO、DiI、DiD、DiR細(xì)胞膜熒光探針的光譜圖

DiO, DiI, DiD 和 DiR幾種細(xì)胞膜熒光探針的異同：

其中I、D、R分別代表了一個，兩個，三個雙鍵，它們是決定波長長度的關(guān)鍵，DiO, DiI, DiD 和 DiR這幾款細(xì)胞膜熒光探針的結(jié)構(gòu)式如下：

DiO高氯酸鹽結(jié)構(gòu)式	Dil高氯酸鹽結(jié)構(gòu)式
DiD高氯酸鹽結(jié)構(gòu)式	DiR碘化物結(jié)構(gòu)式

DiO, DiI, DiD 和 DiR幾種細(xì)胞膜熒光探針的異同：

細(xì)胞膜熒光探針產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：

1. 應(yīng)用廣泛：主要作用是標(biāo)記細(xì)胞膜，用于活的或固定的神經(jīng)元等細(xì)胞或組織的長期示蹤劑，同時還可以標(biāo)記其他疏水結(jié)構(gòu)，例如外泌體

2. 不會影響細(xì)胞的生存力

3. 體外培養(yǎng)的條件下可以存活很長時間

4. 在經(jīng)過固定的神經(jīng)元細(xì)胞膜上的遷移速率為 0.2-0.6mm/day

5. 在活的神經(jīng)元細(xì)胞膜上的的遷移速率為 6mm/day

關(guān)于細(xì)胞膜熒光探針的使用技巧：

1.DiI 可以溶解于無水乙醇、DMSO 和 DMF，溶解度約為 1-2.5mg/ml，發(fā)現(xiàn)較難溶解時可以適當(dāng)用超聲處理以促進(jìn)溶解。

2.用于細(xì)胞膜熒光標(biāo)記時，DiI 的常用濃度為 1-25μM，最常用的濃度為 5-10 μM。

3. DiI 可以直接染色活的細(xì)胞或組織，染色時間通常為 5-20 分鐘。

4. 染固定的細(xì)胞時，通常使用 4%多聚甲醛進(jìn)行固定，使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?dǎo)致熒光背景較高。

Di家族細(xì)胞膜熒光探針選擇小tips：

DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活細(xì)胞或固定細(xì)胞及組織（請您根據(jù)您的需求選擇相應(yīng)的探針），DiI比DiO熒光更亮；DiD，DiR（D12731）波長更長，更適合組織染色；

DiR應(yīng)用實列賞析：

源文獻(xiàn)：Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model Journal: Scientific Reports (2017)

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