細(xì)胞增殖檢測(cè)是一種有價(jià)值的工具，在細(xì)胞生物學(xué)和藥物篩選研究中有著廣泛的應(yīng)用。它們經(jīng)常被用于評(píng)估正常細(xì)胞的健康狀況，對(duì)于評(píng)估新型化療藥物的抗增殖效力和化合物毒性至關(guān)重要。我們給大家總結(jié)了幾種評(píng)估細(xì)胞增殖的方法，這些方法分別基于跟蹤細(xì)胞分裂的后代或監(jiān)測(cè)細(xì)胞健康的關(guān)鍵參數(shù)，包括代謝活動(dòng)、DNA合成或ATP濃度等指標(biāo)來檢測(cè)細(xì)胞增殖。

測(cè)定細(xì)胞增殖的最準(zhǔn)確方法是通過DNA復(fù)制過程中的BrdU（5-溴-2'-脫氧尿苷）摻入來測(cè)量新合成的DNA。或者，可以通過使用 WST、Resazurin或細(xì)胞酯酶裂解染料測(cè)量代謝活性速率或使用CFSE跟蹤細(xì)胞分裂的子代來更快速地評(píng)估細(xì)胞增殖。最終，您可以根據(jù)您細(xì)胞類型、研究方案和您希望研究的作用機(jī)制選擇最適合您的細(xì)胞增殖檢測(cè)方法，下表總結(jié)了目前常用的檢測(cè)細(xì)胞增殖的幾種實(shí)驗(yàn)類型：

測(cè)量細(xì)胞增殖的方法：

DNA合成細(xì)胞增殖試驗(yàn)：

測(cè)量新合成的 DNA是鑒定增殖細(xì)胞的最可靠和最精確的方法。實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)的一種方法是在細(xì)胞周期的S期將胸苷類似物 BrdU (貨號(hào)：AAT-17030) 摻入新復(fù)制的 DNA 中。然后可以使用熒光標(biāo)記的抗BrdU抗體檢測(cè)增殖的BrdU標(biāo)記的細(xì)胞。BrdU染色適用于各種應(yīng)用，包括IHC、ICC 和ELISA，并且適用于流式細(xì)胞術(shù)中其他感興趣的生物標(biāo)志物染色。我們提供用 PE標(biāo)記的抗BrdU小鼠單克隆抗體 (貨號(hào)：AAT-V103305)和未標(biāo)記的小鼠單克隆抗 BrdU 抗體克隆 Bu20a (貨號(hào)：AAT-V103300) 和 (貨號(hào)：AAT-V103295)。

BrdU染色雖然高度準(zhǔn)確和可重復(fù)，但這種方法相當(dāng)繁瑣，因?yàn)樾枰脽晒饪?BrdU抗體進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)才能檢測(cè)增殖，今天給大家?guī)硪豢钊碌幕邳c(diǎn)擊化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞增殖的試劑盒。

基于點(diǎn)擊化學(xué)的EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)（貨號(hào)：AAT-22323）
與BrdU檢測(cè)不同，乙炔基脫氧尿苷 (EdU)核苷細(xì)胞增殖檢測(cè)不依賴于通過抗體來量化新復(fù)制的DNA，也不需要進(jìn)行DNA變性來促進(jìn)抗體對(duì)BrdU標(biāo)記的核苷的檢測(cè)。EdU（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復(fù)制的DNA分子中，隨后通過銅催化的疊氮化物-炔烴環(huán)加成反應(yīng)（即點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)，下圖）將熒光標(biāo)記到EdU上面，來快速檢測(cè)細(xì)胞DNA復(fù)制活性。

圖 1. EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)原理

圖2. BrdU檢測(cè)于EdU檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

由于點(diǎn)擊反應(yīng)利用雙正交部分來檢測(cè)增殖細(xì)胞，因此背景干擾最小。更重要的是，由于反應(yīng)條件溫和，EdU細(xì)胞增殖分析可保持細(xì)胞形態(tài)、抗原結(jié)合位點(diǎn)和樣品完整性，為用戶后續(xù)多重分析提供了機(jī)會(huì)。EdU摻入細(xì)胞后，點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)和后續(xù)洗滌步驟可在60分鐘內(nèi)完成，新復(fù)制的DNA可使用常見熒光成像系統(tǒng)或流式細(xì)胞儀進(jìn)行定量。

如果您不想購(gòu)買試劑盒，那么福利來啦，我們可以為您提供極具性價(jià)比的生產(chǎn)EdU檢測(cè)試劑盒的全套原料及標(biāo)記步驟，助力您的試劑盒開發(fā)之旅：

EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒開發(fā)原料及建議的Protocol：

所需試劑：

1.EdU（貨號(hào)：10540），乙基乙二醇尿苷核苷

2.Cu-TBTA復(fù)合物（貨號(hào)：21050），點(diǎn)擊化學(xué)催化劑

3.抗壞血酸（貨號(hào)：12050）-銅的還原劑

4.疊氮基團(tuán)標(biāo)記熒光染料: Sulfo-Cyanine3 azide（貨號(hào)：A1330）, Sulfo-Cyanine5 azide（貨號(hào)：A3330） , BDP FL azide（11430）

5.PBS、Triton X-100 或 Tween-20

通用的標(biāo)記流程如下：

1.在所需時(shí)間段內(nèi)用10-20uM EdU孵育細(xì)胞/組織；

2.使用含7%甲醛的PBS溶液固定細(xì)胞15分鐘；

3.用PBS洗滌細(xì)胞；

4.用含有2% Triton X-100或0.5% Tween-20的PBS滲透處理30分鐘；

5.再次用PBS洗滌細(xì)胞；

6.制備顯影液： 制備含有2mM Cu-TBTA復(fù)合物，5μm疊氮化物標(biāo)記染料，10mM Tris緩沖液pH 7.4（用于溶解磺化疊氮染料）或含有50％DMSO的100mM TRIS緩沖液（用于溶解非磺化疊氮染料）。 顯影液應(yīng)該是新鮮的，因?yàn)殂~（I）溶液不穩(wěn)定；

1.用顯影混合物處理細(xì)胞30分鐘；

2.用PBS洗滌細(xì)胞；

3.可選：如果細(xì)胞必須用不同的熒光團(tuán)標(biāo)記，請(qǐng)使用您的標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行染色

用磺基化的疊氮化物（水溶性），如Sulfo-Cyanine3疊氮化物和Sulfo-Cyanine5疊氮化物，效果最好。當(dāng)使用非磺化疊氮化物如Cyanine5 azide、Cyanine3 azide或BDP FL azide 時(shí)，需確保顯影液物中的DMSO含量為 50%。如有必要，顯影后可用乙醇對(duì)細(xì)胞進(jìn)行脫色。

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