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中文說明書：HybriDetect：MGHD 1

發(fā)布者：艾美捷科技發(fā)布時間：2024-02-12

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一種用于檢測生物素和FITC標記的分析物（蛋白質(zhì)、基因擴增產(chǎn)物）的通用側(cè)流式檢測條

REF: MGHD 1

規(guī)格：100 Texts

Milenia Biotec GmbH.png

注意：重要更改在邊緣處用虛線表示。在說明書的最后，您將找到一張列出引入更改原因的表格。

一、符號解釋

二、警告和注意事項

1.所有試劑應在原始容器中存放在2-8℃的環(huán)境中。

2.使用前，將所有試劑恢復至室溫（18-28 ℃）。

3.必須遵守所有組分的有效期限。

4.保護檢測條免受濕氣影響；容器必須始終密封。

5.只接觸和標記檢測條的箔紙覆蓋區(qū)域（標記區(qū)域）。

6.廢棄物的處理必須按照當?shù)氐姆ㄒ?guī)進行。

7.檢測緩沖液含有抗微生物試劑，因此避免與皮膚和/或黏膜接觸。

8.適用于專業(yè)用戶。

三、預期用途

HybriDetect是一種通用的側(cè)流式檢測條，用于檢測標記有FITC和生物素的分析物（蛋白質(zhì)、基因擴增產(chǎn)物）。它是一個開發(fā)平臺。

該測試僅供研究使用，不用于診斷目的。

四、提供的材料、儲存和穩(wěn)定性

組分	貨號	規(guī)格	準備	儲存	保質(zhì)期
HybriDetect試紙條：膜上涂有生物素配體；金結(jié)合的多克隆（兔源）抗FITC抗體	MGDS	2×50次	即開即用	2-8℃ 容器必須始終密封（防潮）！	保質(zhì)期至到期日
HybriDetect測定緩沖液：三氯乙酸緩沖鹽水	MGCB	2瓶每瓶10ml	即開即用	2-8℃	保質(zhì)期至到期日

可根據(jù)要求或從公司網(wǎng)站：www.milenia-biotec.de 獲取材料安全數(shù)據(jù)表（MSDS）。

五、所需材料（不包括在內(nèi)）

1、移液管

2、移液管尖（含有PCR的保護性過濾器）

3、反應管或96孔微孔板

六、必要的開發(fā)工作-開發(fā)平臺

開發(fā)一個含有兩種不同標記的探針用于分析物的溶液。

以下條件是必要的：

探針必須標記有：FITC（異硫氰酸熒光素）；生物素

在檢測過程中，使用約100微升的液體（樣品和特定于分析物的溶液）。

所提供的檢測緩沖液（MGCB）可以用作該特定于分析物的溶液的基礎(chǔ)緩沖液。

使用示例：

20微升樣品和80微升特定于分析物的溶液，孵育時間為5分鐘。

注意：

1、體積、特定于分析物的溶液和孵育時間是個體測試開發(fā)的一部分。

2、檢測基因擴增子的基本步驟在第7頁解釋：“檢測性能PCR產(chǎn)物”。擴增產(chǎn)物應該被生物素化，特異性雜交探針應該標記有FITC。原則上，所有擴增程序（聚合酶鏈式反應或等溫擴增，如LAMP或RPA）都可以使用。

七、方法：

Milenia HybriDetect是一種即用型的通用測試條（側(cè)流式試紙），基于使用金顆粒的側(cè)流技術(shù)。該試紙旨在開發(fā)用于多種分析物（如蛋白質(zhì)、抗體或基因擴增產(chǎn)物）的定性或半定量快速測試系統(tǒng)。用戶需要開發(fā)一種特定于分析物的溶液，其中包含用FITC標記的第一種探針（例如抗體、抗原、特異性探針）和用生物素標記的第二種探針（例如抗體、引物）（請參閱第5頁的“常見測試原理”）。

待測樣品與開發(fā)的特定于分析物的溶液混合后，將試紙浸入溶液中。標記有FITC和生物素的結(jié)合分析物首先與試紙的樣品應用區(qū)域中標記有金的FITC特異性抗體結(jié)合。金復合物在毛細作用力的驅(qū)動下通過膜傳播。只有捕獲的分析物金顆粒在通過固定化的生物素配體分子的線時結(jié)合，并隨時間形成紅藍色帶狀。

未結(jié)合的金顆粒遷移到控制線上，并被物種特異性抗體捕獲。隨著孵育時間的延長，會形成一條顏色濃烈的控制帶。

八、常見測試原理

Control Band Dipstick.png

控制帶試紙（Control Band Dipstick）

無論如何，控制帶必須可見！

它是一個控制功能，不能用來評估測試帶結(jié)果的質(zhì)量。如果孵育期后控制帶

不可見，結(jié)果無效！必須使用新的試紙重復測試！

九、結(jié)果判讀

有兩種解讀Milenia HybriDetect試紙結(jié)果的方式：

1）通過目視解讀進行定性解讀

Milenia HybriDetect.png

2）半定量，例如通過評估卡進行評估

Milenia HybriDetect-1.png

十、PCR產(chǎn)物測定性能

從容器中取出所需數(shù)量的試紙條并標記它們。
對于每個要分析的樣品，將100uL的HybriDetect測定緩沖液或個別開發(fā)的緩沖液移液到反應管或微孔板孔中。
直接將5-10uL的雜交產(chǎn)物移液到樣品施加區(qū)域，或者選擇性地將5-10uL的雜交產(chǎn)物加入反應管/孔的溶液中。
將帶有樣品施加區(qū)域的試紙條放入溶液中，垂直放置，孵育時間為5-15分鐘。
孵育結(jié)束后，將試紙條從測定溶液中取出，并立即解讀測試結(jié)果。

Milenia HybriDetect-2.png

注意：

如果需要更高的分析靈敏度，增加PCR產(chǎn)物的體積可能會有所幫助。

體積、特定于分析物的溶液和孵育時間始終是個別測試開發(fā)的一部分。

十一、解讀“PCR”結(jié)果

1.測試帶和控制帶均呈現(xiàn)明顯的紅色條帶注： 1.1 弱染色的測試帶應視為陽性 1.2 陽性結(jié)果可能在1-2分鐘內(nèi)可見 1.3 在雜交產(chǎn)物濃度非常高的情況下，控制帶的強度可能會降低。然而，控制帶仍應清晰可見。	PCR擴增產(chǎn)物已被檢測到（陽性）。
2.只有控制帶作為紅線可見。	未檢測到PCR擴增產(chǎn)物（陰性）。

Milenia HybriDetect-3.png

重要提示：為了檢查反應的特異性，強烈建議引入PCR陰性對照。

十二、PCR故障排除

問題	可能的原因	建議
控制帶不可見。	a) 錯誤或降解的測定緩沖液 b) 試紙條的過期日期已過 c) 試紙條的存儲條件不正確	使用新的（新鮮的）化學試劑
試紙條上呈現(xiàn)陰性結(jié)果，但瓊脂糖凝膠中的條帶清晰可見。	a) 在瓊脂糖凝膠中檢測到非特異性PCR產(chǎn)物 b) 雜交不成功	通過Southern blotting或序列分析檢查PCR產(chǎn)物的身份檢查雜交條件。
礦物油	a) 礦物油影響測定的流動特性 b) 可能會阻礙測試帶的形成。	非常緩慢地從反應管底部移除PCR產(chǎn)物。

十三、PCR測定的靈敏度

Milenia HybriDetect的分析靈敏度相當于或高達乙溴化乙錠染色瓊脂糖凝膠的1,000倍。根據(jù)PCR產(chǎn)物的大小和擴增循環(huán)的數(shù)量，最多可以檢測到5 pg的DNA。

十四、文獻參考

Kiatpathomchai W, et al, J Virol Methods (2008); 153: 214-217

Puthawibool T, et al, J Virol Methods (2009); 156 (1-2): 27-31

Jaroenram W, et al, Mol Cell Probes (2009); 23 (2): 65-70

Nimitphak T, et al, Mol Cell Probes (2009); 24 (1): 1-5

Kikuchi T, et al, Nematology (2009) ; 99 (12): 1365-1369

Piepenburg O, et al, PloS Biology 2006, Volume 4, Issue 7, e204

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