驅動蛋白（Kinesin）活性檢測試劑盒

我們都知道，細胞是構成生物體的基本結構和功能單位，誠然作為生物體的基本結構和功能蛋白，細胞雖然很小，卻五臟俱全，如果把細胞比作一個大型工廠，細胞核就是這個工廠的CPU，會在適當的時候給工廠中各個部門發送正確的指令，核糖體，內質網，線粒體，溶酶體等細胞器就是工廠內的職能部門，細胞骨架構成了這座大型工廠的外立面結果，以及內部錯綜復雜的運輸通道，今天要給大家介紹的主角就是我們細胞工廠傳送帶上的一枚平凡卻不普通的搬運工——驅動蛋白（Kinesin）。

定義：

驅動蛋白是一類能利用ATP水解所釋放的能量驅動自身及所攜帶的貨物分子沿微管運動的馬達蛋白，與細胞內物質運輸有關。驅動蛋白的主動運動支持多種細胞功能，包括有絲分裂、減數分裂和細胞貨物的運輸，例如在軸突運輸中。

結構及功能：

驅動蛋白是一條長80nm的桿狀結構，頭部一端有兩個成球狀的馬達結構域，另一端是重鏈（(kinesin heavy chain，KHC）和輕鏈(kinesin light chain，KLC）組成的扇形尾端，中間是重鏈組成的桿狀區。球狀的頭部具有ATP結合部位和微管結合部位。大多數驅動蛋白趨向于微管的正端，在大多數細胞中，這要求將貨物（例如蛋白質和膜成分）從細胞中心向外圍運輸。這種運輸方式稱為順行運輸。

由于驅動蛋白在在細胞諸多物質運輸過程中起著至關重要的作用，對不同狀態下驅動蛋白活性檢測也有了需求，驅動蛋白通過利用ATP水解的能量沿著微管（MT）上面移動而起作用。一旦驅動蛋白結合到它預定的MT軌道上，ATPase的作用效果通常會提高幾百到幾千倍。MT激活的驅動蛋白ATPase是其運動功能的主要參數，是監測和研究各種實驗條件下驅動蛋白活性的有力方法。

今天給大家帶來一款艾美捷的金牌合作商Cytoskeleton公司開發的Kinesin ELIPA?（酶聯無機磷酸鹽檢測）試劑盒（貨號：BK060）。這款試劑盒主要基于在無機磷酸鹽（Pi）的存在時，在苯胺中嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）將2-氨基-6-巰基-7-甲基嘌呤核糖核苷（MESG）催化為2-氨基-6-巰基-7-甲基嘌呤時在330-360 nm處發生的吸光度變化來反映驅動蛋白活性。一分子無機磷酸鹽將在不可逆的反應中生成一分子2-氨基-6-巰基-7-甲基嘌呤。

產品用途包括：

動力學測量微管激活的驅動蛋白ATPase的活性

驅動蛋白抑制劑的篩選現

驅動蛋白抑制劑IC50s的測定

試劑盒組分：

該試劑盒包含足夠的材料，可進行96次測定。包括以下組件：

1.反應緩沖液

2.ELIPAreagent 1（MESG）

3.ELIPAreagent 1（PNP）

4.驅動蛋白重鏈結構域（貨號：KR01）

5.預制微管蛋白（貨號：MT002）

6.紫杉醇（貨號：TXD01）

7.磷酸鹽標準品

8.ELIPAreagent 1重懸緩沖液

9.ATP（貨號：BSA04）

10.GTP（貨號：BST06）

11.帶有詳細協議的手冊和詳盡的故障排除指南

檢測結果：

微管激活驅動蛋白重鏈ATP酶活性檢測結果：檢測了一些驅動蛋白ATP酶活性。ATP水解的Vmax范圍從驅動蛋白HC的10,000 nmol ATP / min / mg到染色質激酶的470 nmol ATP / min / mg之間。

CENP-E（貨號：CP01），Eg5的（貨號：EG01）和Chromokinesin（貨號： CR01）

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引文賞析：

1.Serena, M et al. Molecular basis of MKLP2-dependent Aurora B transport from chromatin to the anaphase central spindle. J Cell Biol6 July 2020; 219 (7): e201910059. doi: https://doi.org/10.1083/jcb.201910059

2.Sheff, J. G. et al.Novel allosteric pathway of Eg5 regulation identified through multivariate statistical analysis of HX-MS ligand screening data. & Cell. Proteomics mcp.M116.064246 (2017) doi:10.1074/mcp.M116.064246.

3.Guido, B.C. et al.Impact of kinesin Eg5 inhibition by 3,4-dihydropyrimidin-2(1H)-one derivatives on various breast cancer cell features. BMC Cancer 15, 283 (2015). https://doi.org/10.1186/s12885-015-1274-1

4.Kadakkuzha, B. M. et al.High-Throughput Screening for Small Molecule Modulators of Motor Protein Kinesin. Assay Drug Dev. Technol. 12, 470–480 (2014).

5.Abnous, K., Barati, B., Mehri, S. et al.Synthesis and molecular modeling of six novel monastrol analogues: evaluation of cytotoxicity and kinesin inhibitory activity against HeLa cell line. DARU J Pharm Sci 21, 70 (2013). https://doi.org/10.1186/2008-2231-21-70

6.M. Larrayoz and A. Martinez. 2012. Proadrenomedullin N-terminal 20 peptide increases kinesin's velocity both in vitroand in vivo. Endocrinology. 153, 1734-1742.

7.J. Funk et al. 2004. Development of high-throughput screens for discovery of kinesin adenosine triphosphatase modulators. Anal. Biochem. 329, 68-76.

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