近日，由于全國復(fù)工復(fù)產(chǎn)復(fù)學(xué)的大量需求，阿里健康、美團App 等線上平臺聯(lián)合各大第三方檢測機構(gòu)，陸續(xù)開放了線上預(yù)約新冠病毒核酸檢測服務(wù)。

    開通服務(wù)的地區(qū)，人們可以拿起手機即可便捷的預(yù)約核酸檢測，最快24小時即可拿到結(jié)果。如此便捷的服務(wù)，讓廣大民眾歡欣鼓舞，科技的發(fā)展又一次為人們的生活帶來翻天覆地的變化。

     談技術(shù)之前，咱們先說點國計民生重要的事情：

      根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局官網(wǎng)數(shù)據(jù)查詢信息，國內(nèi)已有19個新冠病毒核酸檢測產(chǎn)品取得醫(yī)療器械注冊證書，如下圖。

      廣大醫(yī)療機構(gòu)及百姓做核酸檢測的時候，請一定要認準(zhǔn)這些合法的產(chǎn)品和企業(yè)！

      而瀏覽完上表，我們會發(fā)現(xiàn)，大部分的新冠病毒核酸檢測試劑盒的原理都是基于熒光PCR法，對于一直活躍在科研圈的工作者，自然對鼎鼎大名的PCR技術(shù)不陌生，那么熒光PCR、qPCR、RT-PCR等等各種PCR技術(shù)，您分得清嗎？是不是還在犯迷糊呢？

      今天，小艾就帶你區(qū)分區(qū)分，梳理一下分子診斷領(lǐng)域的“杠把子”-PCR技術(shù)：

       PCR，也就是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction），是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅擴增，放大，用于后續(xù)的檢測和基因比對。因此，無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發(fā)、皮膚或血液，只要能分離出一丁點的DNA，就能用PCR加以放大，進行比對。這也是“微量證據(jù)”的威力之所在。

      PCR由1983年美國Mullis首先提出設(shè)想，1985年由其發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)，即簡易DNA擴增法，意味著PCR技術(shù)的真正誕生。所有的各種PCR都是在此基礎(chǔ)上發(fā)展出來的，比如熒光PCR、qPCR、RT-QPCR等。

      什么是熒光PCR？

      熒光PCR技術(shù)是20世紀(jì)90年代中期發(fā)展起來的一種新型核酸定量技術(shù)。該技術(shù)具有實時監(jiān)測、快速、靈敏、精確等特點，是對原有PCR技術(shù)的革新，擴大了PCR的應(yīng)用范圍。

      熒光PCR法根據(jù)化學(xué)發(fā)光原理可以分為染料法和探針法，它們的區(qū)別是什么呢？

      1.染料法：可用的染料有SYBR®Green I 、SolisGreen® 等；染料能夠與DNA雙鏈結(jié)合，當(dāng)PCR擴增的時候，染料結(jié)合到DNA上，從而發(fā)光，單個的染料不發(fā)光，這樣就能收集到信號。

      2.探針法：TaqMan 探針法即除了引物外另外設(shè)置一個探針，在探針的兩端分別帶上發(fā)光基團和淬滅基團，這個時候，兩個平衡不發(fā)光，但是當(dāng)DNA通過引物合成的時候，探針被折斷，釋放出發(fā)光基團和淬滅基團，兩個距離較遠，發(fā)光基團產(chǎn)生熒光，被機器收集到信號，從而檢測到基因的量。

     根據(jù)擴增策略和檢測產(chǎn)物手段的不同，PCR又可分為定性PCR和定量PCR。這里主要說一說定量PCR。

     定量PCR，也就是qPCR,由于其英文全稱是real-time quantitative polymerase chain reaction，有些也稱為RT-qPCR，國外通常簡稱為qPCR,是由美國Applied Bisystems公司于1996年研制出的一種新型核酸定量技術(shù)，并隨著熒光PCR 儀的推出而逐漸得到廣泛應(yīng)用。也是現(xiàn)在常用于臨床檢驗的PCR技術(shù)，該技術(shù)在常規(guī)PCR 基礎(chǔ)上運用熒光共振能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象( fluorescence resonance energy transfer, FRET) 技術(shù), 加入熒光標(biāo)記探針, 巧妙地把核酸擴增、雜交、光譜分析和實時檢測技術(shù)結(jié)合在一起, 在PCR 指數(shù)擴增期間通過連續(xù)監(jiān)測熒光信號的強弱來即時測定特異性產(chǎn)物的量, 并據(jù)此推斷目的基因的初始量。

      RT-PCR,實際上是反轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction），又稱逆轉(zhuǎn)錄PCR。國際上的約定俗成的是：RT-PCR 特指反轉(zhuǎn)錄 PCR，而 Real-time PCR 一般縮寫為 qPCR（quantitative real-time PCR）

      RT-PCR原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄稱cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因的表達。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數(shù)量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。

      RT-PCR技術(shù)靈敏而且用途廣泛，可用檢測細胞、組織中基因表達水平，細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特點基因的cDNA序列等。如果用于定量檢測，就是上文提到的qPCR， 此次新冠病毒核酸檢測熒光PCR技術(shù)，就是基于此。

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         新冠病毒核酸檢測試劑盒優(yōu)勢：

      特異識別和檢測新冠病毒SARS-CoV-2

      適用于人痰液、鼻液、咽拭子樣本

      可信度高、即用型、快速出結(jié)果 < 2 hr

       新冠病毒核酸檢測試劑盒檢測原理圖示：

       新冠病毒核酸檢測試劑盒組分：

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        新冠病毒一步法PCR檢測試劑盒檢測原理：是基于一步法反轉(zhuǎn)錄實時定量PCR技術(shù)（real-time RT-PCR）,通過反轉(zhuǎn)錄病毒RNA實現(xiàn)快速高效的檢測新冠病毒(SARS-CoV-2)

      新冠病毒一步法PCR檢測試劑盒（貨號#08-65-00250）組分：

      小編福利：如果想要獲取新型冠狀病毒核酸檢測引物和探針序列（Specific primers and probes for detection 2019 novel coronavirus）可以參考

       1.中國國家疾病控制中心

      鏈接：

      http://ivdc.chinacdc.cn/kyjz/202001/t20200121_211337.html

       2.WHO幫助文件《Diagnostic detection of 2019-nCoV by real-time RT-PCR》

    （原文鏈接地址：https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/protocol-v2-1.pdf?sfvrsn=a9ef618c_2），其中RdRP_SARSr-P2為檢測2019-conV的特異性探針，P1為通用探針，能檢測2019-nCoV、SARS-CoV以及bat-SARS-related CoV。

       艾美捷科技有限公司，通過提供完整的產(chǎn)品和服務(wù)體系、便利的客戶關(guān)系和供應(yīng)鏈管理，為生命科學(xué)研究工作者提供整體打包方案。我們的企業(yè)的核心價值觀：“學(xué)習(xí)、創(chuàng)新、合作、卓越”。激發(fā)我們內(nèi)在的創(chuàng)造力，提供有競爭力的生物醫(yī)學(xué)產(chǎn)品和服務(wù)，持續(xù)為客戶創(chuàng)造最大價值是我們的企業(yè)使命。我們的企業(yè)愿景是成為受人尊重、世界一流的生物醫(yī)學(xué)產(chǎn)品及服務(wù)供應(yīng)商。

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