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脂褐質(zhì)由高度自發(fā)熒光的氧化蛋白質(zhì)和脂質(zhì)顆粒組成,這些顆粒在老化細(xì)胞的溶酶體中積聚。脂褐質(zhì)顆粒在用于熒光顯微鏡檢查的所有通道中都發(fā)出明亮的熒光,并隨著年齡的增長(zhǎng)在各種細(xì)胞和組織類型中積累。因此,在某些成人人體組織或老年動(dòng)物組織中對(duì)特定免疫熒光信號(hào)進(jìn)行成像實(shí)際上是不可能的,除非采用方法來(lái)淬滅或掩蓋脂褐質(zhì)熒光。
今天給大家?guī)?lái)艾美捷代理品牌熒光領(lǐng)域領(lǐng)導(dǎo)者Biotium研發(fā)的TrueBlack Lipofuscin Autofluorescence Quencher(貨號(hào):23007),可在用于免疫熒光染色的組織切片中淬滅脂褐素自發(fā)熒光。

TrueBlack的特點(diǎn):
可消除脂褐質(zhì)自發(fā)熒光
減少來(lái)自非脂褐質(zhì)來(lái)源的自發(fā)熒光
與Sudan Black B不同,不會(huì)導(dǎo)致高背景
可在免疫熒光染色之前或之后使用
為人類和老年動(dòng)物組織的熒光成像掃清了道路
傳統(tǒng)上,Sudan Black B已被用于在免疫熒光染色后通過(guò)用染料孵育組織切片來(lái)淬滅脂褐素自發(fā)熒光。然而,雖然它掩蓋了脂褐質(zhì)的自發(fā)熒光,但Sudan Black B還在紅色和遠(yuǎn)紅色通道中引入了均勻的非特異性背景熒光(圖1),從而限制了這些波長(zhǎng)中熒光染料的使用。目前Biotium開(kāi)發(fā)了TrueBlack 作為Sudan Black B 的優(yōu)越替代品。TrueBlack 可淬滅脂褐質(zhì)熒光,而紅色/遠(yuǎn)紅色背景熒光的增加要少得多(圖1)。TrueBlack 處理可以在免疫染色之前或之后進(jìn)行。它快速、簡(jiǎn)單,對(duì)熒光抗體或核復(fù)染的信號(hào)影響最小,從而保持免疫染色的信噪比(圖2-3)。
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| 圖1. 甲醇固定成人腦切片中的脂褐質(zhì)自發(fā)熒光。在未經(jīng)處理的組織(第一行)中,脂褐質(zhì)以熒光顆粒的形式出現(xiàn),在所有熒光通道中都發(fā)出熒光。蘇丹黑 B(第二行)掩蓋了脂褐質(zhì)自發(fā)熒光,但在紅色和遠(yuǎn)紅色通道中引入了背景。TrueBlack(第三行)封閉了脂褐質(zhì),熒光背景增加最小。根據(jù)產(chǎn)品Protocol,甲醇固定的成人大腦皮層冷凍切片未經(jīng)處理或用 70%乙醇中的0.1% Sudan Black B或1X TrueBlack 染色。樣品在蔡司LSM 700共聚焦顯微鏡的 FITC(綠色)、Cy3(紅色)和 Cy5(遠(yuǎn)紅色)通道中以相同的增益設(shè)置成像。 |
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| 圖2. 免疫熒光染色前使用 TrueBlack 預(yù)處理淬滅脂褐質(zhì)自發(fā)熒光。甲醛固定的人皮層冷凍切片未經(jīng)處理 (A) 或用 TrueBlack (B) 處理,然后用 CF 488A 抗 NeuN 抗體偶聯(lián)物(綠色)和 DAPI(藍(lán)色)染色。在蔡司 LSM700 共聚焦顯微鏡上的所有通道中對(duì)切片進(jìn)行成像。A. 脂褐質(zhì)在所有通道中都發(fā)出明亮的熒光,在未經(jīng)處理的組織的合并圖像中顯示為白點(diǎn)(紅色箭頭)。B. TrueBlack 預(yù)處理消除了脂褐質(zhì)自發(fā)熒光,對(duì)特定染色的影響可以忽略不計(jì)。 |
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| 圖3. 免疫熒光染色后使用 TrueBlack 后處理淬滅脂褐質(zhì)自發(fā)熒光。人大腦皮層的甲醇固定冷凍切片先用兔抗GFAP染色,然后用 CF 640R 山羊抗兔(貨號(hào): 20176)和DAPI(貨號(hào): 40009)染色。切片未經(jīng)處理或用TrueBlack 處理,然后安裝在 EverBrite 封固劑中(貨號(hào): 23001)。未處理的切片(左)除了GFAP免疫熒光(膠質(zhì)突起,品紅色)和DAPI染色(細(xì)胞核,藍(lán)色)外,還顯示出脂褐質(zhì)自發(fā)熒光(白色箭頭)。TrueBlack (右)消除了脂褐質(zhì)熒光,同時(shí)為遠(yuǎn)紅通道(品紅色)和核復(fù)染(藍(lán)色)中的 GFAP 免疫染色保持良好的信噪比。 |
TrueBlack 還可以減少來(lái)自其他來(lái)源的自發(fā)熒光,例如膠原蛋白、彈性蛋白、紅細(xì)胞和一般背景熒光。它在淬滅這些自發(fā)熒光源方面不如對(duì)脂褐質(zhì)有效,但它可以改善人類和非人類組織類型的背景(圖4-5)。TrueBlack 還被用于淬滅聚碳酸酯濾光片上的背景熒光,這些濾光片常被用作成像細(xì)胞計(jì)數(shù)的細(xì)胞支持物。
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| 圖4. TrueBlack 可減少FITC、Cy 3和Cy 5通道中人腎切片中的非脂褐質(zhì)自發(fā)熒光。人腎冷凍切片在冰冷的甲醇中固定,細(xì)胞核用DAPI(藍(lán)色)染色。自發(fā)熒光在Zeiss LSM 700 共聚焦顯微鏡上在所有通道中成像,兩個(gè)樣品的成像設(shè)置相同。底部:TrueBlack?處理。 |
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| 圖5. TrueBlack 可減少大鼠腎臟組織切片中 FITC 通道中的非脂褐質(zhì)自發(fā)熒光。將大鼠腎冷凍切片固定在甲醛中,未經(jīng)處理 (A) 或用TrueBlack (B)處理。細(xì)胞核用DAPI(藍(lán)色)染色。FITC通道(綠色)中的自發(fā)熒光在Zeiss LSM700 共聚焦顯微鏡上對(duì)每個(gè)樣品使用相同的成像設(shè)置進(jìn)行成像。 |
Biotium 還開(kāi)發(fā)了TrueBlack Plus(貨號(hào):23014),這是一種下一代脂褐素猝滅劑,其遠(yuǎn)紅背景比原來(lái)的 TrueBlack(貨號(hào):23007)更低。TrueBlack Plus 也是唯一一種可用于水性緩沖液而非70% EtOH的脂褐素淬滅劑,可延長(zhǎng)厚組織樣品的孵育時(shí)間而不會(huì)收縮。
用于WB和免疫熒光(IF)的背景淬滅劑:
處理專門(mén)用于免疫組化中脂褐素淬滅劑TrueBlack ,我們還提供用于清除蛋白質(zhì)印跡(WB)背景的TrueBlack WB Blocking Buffer Kit (貨號(hào):23013),以及用于阻斷免疫熒光(IF)非特異性染色的TrueBlack IF Background Suppressor System (Permeabilizing) (23012)。
相關(guān)產(chǎn)品推薦:
| 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
| 23007 | TrueBlack Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 20X in DMF |
| 23014 | TrueBlack Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 40X in DMSO |
| 23002 | EverBrite? Mounting Medium with DAPI |
| 23003 | EverBrite? Hardset Mounting Medium |
| 23004 | EverBrite? Hardset Mounting Medium with DAPI |
| 23005 | CoverGrip? Coverslip Sealant |
| 23013 | TrueBlack WB Blocking Buffer Kit |
| 23012 | TrueBlack IF Background Suppressor System (Permeabilizing) |
TrueBlack 相關(guān)引文賞析:
Biotium公司是一家在熒光技術(shù)領(lǐng)域獨(dú)樹(shù)一幟的生物技術(shù)公司,公司位于美國(guó)加利福尼亞的BAY AREA------世界上首要的生物科技中心。該公司一直致力于開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)用于生物醫(yī)學(xué)研究的熒光指示劑及其他特殊生化產(chǎn)品。其產(chǎn)品被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生 物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、診斷學(xué)、生物化學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、血液流動(dòng)檢測(cè)及大規(guī)模藥物篩選等眾多領(lǐng)域。Biotium公司專利產(chǎn)品眾多,包括已經(jīng)被廣泛使用的實(shí)時(shí)PCR定量熒光染料EvaGreen、具有劃時(shí)代意義的凝膠核酸染料Gel Red和GelGreen,以及最新推出的Cheetah Taq熱啟動(dòng)酶和CF系列蛋白質(zhì)標(biāo)記染料等。 目前,Biotium已將其許多專利技術(shù)授權(quán)給一些主要的國(guó)際生物技術(shù)公司,包括安捷倫、BD生物科學(xué)、Biolegend、BioRad、EMD Millipore、Illumina、PerkinElmer、Qiagen、Roche、Sartorius AG、Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等。 寶天生物科技(BTProbes)由美國(guó)知名熒光試劑企業(yè)Biotium公司于2007年在華成立,是一家專注于生物熒光試劑研發(fā)的高科技企業(yè),是多家歐美企業(yè)長(zhǎng)期供貨商,產(chǎn)品被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各個(gè)領(lǐng)域。目前寶天可提供超過(guò)100款熱賣的熒光蛋白(PE, APC),其他熒光原料(FITC),用于PCR熒光原料(5-FAM,6-TAMRA)等。
作為Biotium在中國(guó)的區(qū)域總代理,艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供最全面的Biotium的產(chǎn)品。
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