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【Biotium力薦】TrueBlack——最好用的脂褐素自發(fā)熒光淬滅劑

發(fā)布者:艾美捷科技    發(fā)布時(shí)間:2023-06-21     
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脂褐質(zhì)由高度自發(fā)熒光的氧化蛋白質(zhì)和脂質(zhì)顆粒組成,這些顆粒在老化細(xì)胞的溶酶體中積聚。脂褐質(zhì)顆粒在用于熒光顯微鏡檢查的所有通道中都發(fā)出明亮的熒光,并隨著年齡的增長(zhǎng)在各種細(xì)胞和組織類型中積累。因此,在某些成人人體組織或老年動(dòng)物組織中對(duì)特定免疫熒光信號(hào)進(jìn)行成像實(shí)際上是不可能的,除非采用方法來(lái)淬滅或掩蓋脂褐質(zhì)熒光。   


今天給大家?guī)?lái)艾美捷代理品牌熒光領(lǐng)域領(lǐng)導(dǎo)者Biotium研發(fā)的TrueBlack Lipofuscin Autofluorescence Quencher(貨號(hào):23007),可在用于免疫熒光染色的組織切片中淬滅脂褐素自發(fā)熒光。  


TrueBlack Lipofuscin Autofluorescence Quencher.png


 TrueBlack的特點(diǎn):

  • 可消除脂褐質(zhì)自發(fā)熒光

  • 減少來(lái)自非脂褐質(zhì)來(lái)源的自發(fā)熒光

  • 與Sudan Black B不同,不會(huì)導(dǎo)致高背景

  • 可在免疫熒光染色之前或之后使用

  • 為人類和老年動(dòng)物組織的熒光成像掃清了道路

 

TrueBlack淬滅脂褐質(zhì)背景熒光效果Sudan Black B更好

傳統(tǒng)上,Sudan Black B已被用于在免疫熒光染色后通過(guò)用染料孵育組織切片來(lái)淬滅脂褐素自發(fā)熒光。然而,雖然它掩蓋了脂褐質(zhì)的自發(fā)熒光,但Sudan Black B還在紅色和遠(yuǎn)紅色通道中引入了均勻的非特異性背景熒光(圖1),從而限制了這些波長(zhǎng)中熒光染料的使用。目前Biotium開(kāi)發(fā)了TrueBlack 作為Sudan Black B 的優(yōu)越替代品。TrueBlack 可淬滅脂褐質(zhì)熒光,而紅色/遠(yuǎn)紅色背景熒光的增加要少得多(圖1)。TrueBlack 處理可以在免疫染色之前或之后進(jìn)行。它快速、簡(jiǎn)單,對(duì)熒光抗體或核復(fù)染的信號(hào)影響最小,從而保持免疫染色的信噪比(圖2-3)。

Sudan Black B.png

圖1. 甲醇固定成人腦切片中的脂褐質(zhì)自發(fā)熒光。在未經(jīng)處理的組織(第一行)中,脂褐質(zhì)以熒光顆粒的形式出現(xiàn),在所有熒光通道中都發(fā)出熒光。蘇丹黑 B(第二行)掩蓋了脂褐質(zhì)自發(fā)熒光,但在紅色和遠(yuǎn)紅色通道中引入了背景。TrueBlack(第三行)封閉了脂褐質(zhì),熒光背景增加最小。根據(jù)產(chǎn)品Protocol,甲醇固定的成人大腦皮層冷凍切片未經(jīng)處理或用 70%乙醇中的0.1% Sudan Black B或1X TrueBlack  染色。樣品在蔡司LSM 700共聚焦顯微鏡的 FITC(綠色)、Cy3(紅色)和 Cy5(遠(yuǎn)紅色)通道中以相同的增益設(shè)置成像。

 

TrueBlack 處理可以在免疫熒光染色之前或之后進(jìn)行:

TrueBlack.png

圖2. 免疫熒光染色前使用 TrueBlack 預(yù)處理淬滅脂褐質(zhì)自發(fā)熒光。甲醛固定的人皮層冷凍切片未經(jīng)處理 (A) 或用 TrueBlack (B) 處理,然后用 CF 488A 抗 NeuN 抗體偶聯(lián)物(綠色)和 DAPI(藍(lán)色)染色。在蔡司 LSM700 共聚焦顯微鏡上的所有通道中對(duì)切片進(jìn)行成像。A. 脂褐質(zhì)在所有通道中都發(fā)出明亮的熒光,在未經(jīng)處理的組織的合并圖像中顯示為白點(diǎn)(紅色箭頭)。B. TrueBlack 預(yù)處理消除了脂褐質(zhì)自發(fā)熒光,對(duì)特定染色的影響可以忽略不計(jì)。

TrueBlack-1.png

圖3. 免疫熒光染色后使用 TrueBlack 后處理淬滅脂褐質(zhì)自發(fā)熒光。人大腦皮層的甲醇固定冷凍切片先用兔抗GFAP染色,然后用 CF 640R 山羊抗兔(貨號(hào): 20176)和DAPI(貨號(hào): 40009)染色。切片未經(jīng)處理或用TrueBlack 處理,然后安裝在 EverBrite 封固劑中(貨號(hào): 23001)。未處理的切片(左)除了GFAP免疫熒光(膠質(zhì)突起,品紅色)和DAPI染色(細(xì)胞核,藍(lán)色)外,還顯示出脂褐質(zhì)自發(fā)熒光(白色箭頭)。TrueBlack (右)消除了脂褐質(zhì)熒光,同時(shí)為遠(yuǎn)紅通道(品紅色)和核復(fù)染(藍(lán)色)中的 GFAP 免疫染色保持良好的信噪比。

 

TrueBlack 可以減少脂褐質(zhì)以外來(lái)源的自發(fā)熒光

TrueBlack  還可以減少來(lái)自其他來(lái)源的自發(fā)熒光,例如膠原蛋白、彈性蛋白、紅細(xì)胞和一般背景熒光。它在淬滅這些自發(fā)熒光源方面不如對(duì)脂褐質(zhì)有效,但它可以改善人類和非人類組織類型的背景(圖4-5)。TrueBlack 還被用于淬滅聚碳酸酯濾光片上的背景熒光,這些濾光片常被用作成像細(xì)胞計(jì)數(shù)的細(xì)胞支持物。

TrueBlack-2.png

圖4. TrueBlack  可減少FITC、Cy 3和Cy 5通道中人腎切片中的非脂褐質(zhì)自發(fā)熒光。人腎冷凍切片在冰冷的甲醇中固定,細(xì)胞核用DAPI(藍(lán)色)染色。自發(fā)熒光在Zeiss LSM 700 共聚焦顯微鏡上在所有通道中成像,兩個(gè)樣品的成像設(shè)置相同。底部:TrueBlack?處理。

TrueBlack-3.png

圖5. TrueBlack 可減少大鼠腎臟組織切片中 FITC 通道中的非脂褐質(zhì)自發(fā)熒光。將大鼠腎冷凍切片固定在甲醛中,未經(jīng)處理 (A) 或用TrueBlack (B)處理。細(xì)胞核用DAPI(藍(lán)色)染色。FITC通道(綠色)中的自發(fā)熒光在Zeiss LSM700 共聚焦顯微鏡上對(duì)每個(gè)樣品使用相同的成像設(shè)置進(jìn)行成像。

 

TrueBlack  Plus:一種獨(dú)特的脂褐質(zhì)淬滅劑,遠(yuǎn)紅背景低于原版 TrueBlack

Biotium 還開(kāi)發(fā)了TrueBlack Plus(貨號(hào):23014),這是一種下一代脂褐素猝滅劑,其遠(yuǎn)紅背景比原來(lái)的 TrueBlack(貨號(hào):23007)更低。TrueBlack Plus 也是唯一一種可用于水性緩沖液而非70% EtOH的脂褐素淬滅劑,可延長(zhǎng)厚組織樣品的孵育時(shí)間而不會(huì)收縮。 


用于WB和免疫熒光(IF)的背景淬滅劑:

處理專門(mén)用于免疫組化中脂褐素淬滅劑TrueBlack ,我們還提供用于清除蛋白質(zhì)印跡WB背景的TrueBlack WB Blocking Buffer Kit (貨號(hào):23013),以及用于阻斷免疫熒光IF非特異性染色的TrueBlack IF Background Suppressor System (Permeabilizing) (23012)。  


相關(guān)產(chǎn)品推薦:

貨號(hào)產(chǎn)品名稱
23007TrueBlack Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 20X in DMF
23014TrueBlack Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 40X in DMSO
23002EverBrite? Mounting Medium with DAPI
23003EverBrite? Hardset Mounting Medium
23004EverBrite? Hardset Mounting Medium with DAPI
23005CoverGrip? Coverslip Sealant
23013TrueBlack WB Blocking Buffer Kit
23012TrueBlack IF Background Suppressor System (Permeabilizing)


        TrueBlack 相關(guān)引文賞析:

Biotium公司是一家在熒光技術(shù)領(lǐng)域獨(dú)樹(shù)一幟的生物技術(shù)公司,公司位于美國(guó)加利福尼亞的BAY AREA------世界上首要的生物科技中心。該公司一直致力于開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)用于生物醫(yī)學(xué)研究的熒光指示劑及其他特殊生化產(chǎn)品。其產(chǎn)品被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生 物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、診斷學(xué)、生物化學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、血液流動(dòng)檢測(cè)及大規(guī)模藥物篩選等眾多領(lǐng)域。Biotium公司專利產(chǎn)品眾多,包括已經(jīng)被廣泛使用的實(shí)時(shí)PCR定量熒光染料EvaGreen、具有劃時(shí)代意義的凝膠核酸染料Gel Red和GelGreen,以及最新推出的Cheetah Taq熱啟動(dòng)酶和CF系列蛋白質(zhì)標(biāo)記染料等。   目前,Biotium已將其許多專利技術(shù)授權(quán)給一些主要的國(guó)際生物技術(shù)公司,包括安捷倫、BD生物科學(xué)、Biolegend、BioRad、EMD Millipore、Illumina、PerkinElmer、Qiagen、Roche、Sartorius AG、Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等。   寶天生物科技(BTProbes)由美國(guó)知名熒光試劑企業(yè)Biotium公司于2007年在華成立,是一家專注于生物熒光試劑研發(fā)的高科技企業(yè),是多家歐美企業(yè)長(zhǎng)期供貨商,產(chǎn)品被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各個(gè)領(lǐng)域。目前寶天可提供超過(guò)100款熱賣的熒光蛋白(PE, APC),其他熒光原料(FITC),用于PCR熒光原料(5-FAM,6-TAMRA)等。   


作為Biotium在中國(guó)的區(qū)域總代理,艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供最全面的Biotium的產(chǎn)品。

產(chǎn)品中心分類
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