不同類(lèi)型抗體儲(chǔ)存時(shí)注意要避免污染或損失

(請(qǐng)每次均查看抗體說(shuō)明書(shū)是否有特殊的保存要求。Abcam 公司對(duì)于非正確保存的抗體不保證其有效。

對(duì)于保存適當(dāng)?shù)目贵w，大多數(shù)的活性保持時(shí)間為數(shù)個(gè)月甚至數(shù)年。)

保存溫度和條件

很多抗體的最佳保存條件是分裝成小包裝凍存于 -20°C 或 -80°C。分裝能使凍融引起的損失減到最小，同時(shí)可避免多次在一個(gè)管內(nèi)取樣而由 槍頭引入的污染。分裝凍存的抗體，融解一次后剩余抗體應(yīng)保存于 4°C。收到抗體后，應(yīng) 10,000 x g 離心 20 秒，使管口螺紋內(nèi)的抗體溶液 全部離心至管底，用低蛋白吸附性的微量離心管分裝。分裝量的多少取決于每次試驗(yàn)的使用量。分裝量不能少于 10μl；分裝量越少，由于蒸 發(fā)和吸附于管內(nèi)壁而引起的損失會(huì)越大。

除了腹水液含蛋白酶應(yīng)立即凍存外，大多數(shù)抗體接收后可在 4°C 保存一至兩周，隨后可凍存以長(zhǎng)期保存。同樣，應(yīng)按照說(shuō)明書(shū)推薦的條件進(jìn) 行保存。
免責(zé)聲明和其他特殊情況酶聯(lián)抗體，不應(yīng)凍存，4°C 可保證穩(wěn)定。凍融會(huì)降低酶的活性，同時(shí)影響抗體的吸附能力。

偶聯(lián)標(biāo)記的抗體，無(wú)論是標(biāo)記的熒光染料、酶還是生物素，都應(yīng)保存于深色的管內(nèi)并包裹上鋁箔。如果暴露在光線下可能會(huì)減弱偶聯(lián)標(biāo)記物 的活性。熒光標(biāo)記物尤其容易受到光漂白作用，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均應(yīng)避光。

免疫球蛋白 G3 同種型抗體凍融后易形成聚合物，因此應(yīng)一直保存于 4°C。

用疊氮化鈉防止污染

為防止微生物污染，在抗體溶液中應(yīng)加入疊氮化鈉，終濃度為 0.02%（質(zhì)量百分比）。很多品牌 的抗體已經(jīng)包含了 0.02-0.05%的疊氮化 納，在說(shuō)明書(shū)的“保存緩沖液”部分會(huì)有描述。

什么時(shí)候不能用疊氮化納

如果用抗體標(biāo)記活細(xì)胞，或用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，確保所用制劑中不含疊氮化鈉。這種抗生素對(duì)大多數(shù)有機(jī)體都有毒性：會(huì)阻斷細(xì)胞色

素電子傳遞系統(tǒng)的信號(hào)。

疊氮化鈉會(huì)干擾胺基的偶聯(lián)標(biāo)記，應(yīng)在進(jìn)行標(biāo)記之前將其除去。標(biāo)記后抗體可保存于疊氮化納，也可用不含胺基的硫柳汞替代。

疊氮化鈉可用透析或凝膠過(guò)濾法從抗體溶液中除去。免疫球蛋白 G 的分子量是 150,000 kDa（免疫球蛋白 M 的分子量是 600,000
kDa），疊氮 化鈉的分子量是 65 道爾頓。使用 14,000 kDa 的微量透析裝置，隨著疊氮化鈉的擴(kuò)散，抗體將保留。將帶有燒杯的磁力攪拌器置于4°C攪拌 透析裝置 6 小時(shí),每毫升抗體溶液要用至少1升的磷酸鹽緩沖液。更換 2 次磷酸鹽緩沖液，每次均攪拌至少 6 小時(shí)。如果可以的話，所有材料 均要求無(wú)菌，所有溶液都應(yīng)無(wú)菌配制。

凍存/復(fù)蘇的損失

反復(fù)凍融可使抗體變性，使其形成聚合物而降低了抗體結(jié)合能力。

大多數(shù)抗體在 -20°C 保存就足夠了，沒(méi)有必要置于 -80°C 保存。千萬(wàn)不要使用無(wú)霜的冰箱。反復(fù)凍融能減少霜的形成，但這正是應(yīng)該避免的。 同理，抗體應(yīng)該放置于冰箱中溫度變化最小的部位，如應(yīng)放置于冰箱格里，而不應(yīng)放置于冰箱門(mén)上。

一些研究者為防止反復(fù)凍融的損失，在抗體中加入終濃度為 50% 的甘油作為抗凍劑。甘油可以將冰點(diǎn)降低至 -20°C 以下。很多抗體都可以 這樣做，本公司提供的抗體只有一小部分測(cè)試了這種保存條件下的穩(wěn)定性，我們只保證那些按照說(shuō)明書(shū)推薦條件儲(chǔ)存的抗體有活性。由于 -80°C 低于甘油的冰點(diǎn)，所以加了甘油的溶液不應(yīng)保存于 -80°C。注意，甘油可能會(huì)被細(xì)菌污染。如果要加入甘油或其他防凍劑，應(yīng)注意無(wú)菌處理。

稀釋至工作濃度的抗體最好不要在 4°C 保存超過(guò)一天時(shí)間。通常蛋白質(zhì)在較高濃度保存時(shí)不易發(fā)生降解，理想濃度為 1mg/ml或更高，因?yàn)?抗體溶液中包含了如牛血清白蛋白等蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑。加入的蛋白可吸附于管壁從而使抗體的損失減到最小。對(duì)用于聚合的抗體，不應(yīng)加入蛋 白穩(wěn)定劑，因?yàn)槠淇赡軙?huì)與抗體競(jìng)爭(zhēng)而降低抗體的聚合活性。