用IgM 抗體進(jìn)行免疫沉淀

由于IgM 抗體的五聚體結(jié)構(gòu)，所以很難用于免疫沉淀實(shí)驗(yàn)。IgM 抗體還不能很好地結(jié)合蛋白A 或蛋白G。有兩種方法可供選擇：

a 蛋白L 珠子

蛋白L是一個(gè)36 kDa 的免疫球蛋白結(jié)合蛋白，可從大消化鏈球菌純化。蛋白L 可以結(jié)合抗體的輕鏈（而蛋白A 和G 結(jié)合抗體重鏈的Fc 段）。

蛋白L 比蛋白A 或G 結(jié)合抗體類(lèi)型范圍更廣泛，因?yàn)橹劓湹娜魏我徊糠侄疾粎⑴c結(jié)合相互作用。它能夠結(jié)合所有抗體類(lèi)型，包括IgG、IgM、IgA、IgE 及IgD。單鏈可變區(qū)段（ScFv）和Fab 片段也能結(jié)合蛋白L。

蛋白L 僅限于結(jié)合那些含有kappa(κ) 輕鏈（即VL 功能區(qū)）的免疫球蛋白。在人類(lèi)和小鼠中，以kappa (κ) 輕鏈為主。其余的免疫球蛋白有l(wèi)ambda(λ) 輕鏈，它不結(jié)合蛋白L。此外，蛋白L 僅能有效結(jié)合kappa 輕鏈的某些亞型。例如，它結(jié)合人類(lèi)VκI、VκIII 和VκIV 亞型，但不結(jié)合VκII 亞型。對(duì)于小鼠，僅限于結(jié)合那些具有VκI 輕鏈的免疫球蛋白。

利用蛋白L有幾個(gè)優(yōu)勢(shì)：

1.蛋白L 不能結(jié)合牛、綿羊或山羊的抗體，因此非常適合從含牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液中純化小鼠IgM。

2.蛋白L 可以結(jié)合多種動(dòng)物來(lái)源抗體的kappa 輕鏈而不干擾抗原結(jié)合位點(diǎn)，因此非常適用于用IgM 抗體的免疫沉淀。

3. 它能結(jié)合所有類(lèi)別的免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA、IgE 及IgD），因此對(duì)IgM 純化特別有用，因?yàn)镮gM 不能用蛋白A 或G 純化。