一、各種蛋白染色方法的靈敏度比較

二、考馬斯亮藍染色

CBB 染色液

0.5%考馬斯亮藍 G250 或 R250

40%甲醇

10%乙酸

將 CBB 溶于甲醇中并不停的攪拌 15min。加入乙酸與 ddH2O

脫色液：30%甲醇

10%乙酸

染色方法：1.在搖床上染色 30min.

2.脫色至蛋白點或條帶清晰可見

3. ddH2O 洗 3-5 次

三、膠體考馬氏亮藍染色Colloidal Coomassie Staining（Cambridg ecentre for porteomics）

sensitivity = ~100ng

1.固定：甲醇/醋酸/H2O(45:1:54)至少 20min.

2. 染色 12-18hr。

染色液：

17% (w/v) 硫酸銨

34%甲醇

0.5%醋酸

0.1% (w/v) Coomassie G250

3. 脫色：用 H2O 脫色至蛋白點和背景清晰.

雙向電泳蛋白點的切取和保存

1.用 PDQuest 軟件或肉眼比對，找出感興趣的蛋白點，并做好標記和記錄。

2. 用 MilliQ 水沖洗膠 2 次。

3. 用色譜純甲醇和 MilliQ 水沖洗 Ep 管

4. 將槍頭(200ul)下端剪去，使其內(nèi)徑略小于蛋白斑點的直徑，用色譜純甲醇和MilliQ 水沖洗槍頭。

5. 對準斑點中央小心將蛋白切割下來，放入 Ep 管，MilliQ 水漂洗 2 次，如膠塊太大，將其切成 1 x 1 mm 的膠片。

6.將切好的點做好標記和記錄，置-80oC 保存或凍干后-20oC 存放。

注意事項：

1.盡量避免皮膚和頭發(fā)的角蛋白的污染，在操作過程中應(yīng)戴一次性的 PE 手套（不用乳膠手套）和帽子。

2. 不要將膠長期存放于乙酸溶液中。

3. Ep 管及染膠的容器必須用甲醇和水充分清洗，尤其應(yīng)與進行 Western blotting的容器分開，以避免 casein 或 BSA 的污染。