總胰島素原ELISA是一種定量免疫測定法，用于測定人血清和血漿（EDTA和肝素）樣本中的總胰島素原（完整胰島素原、32-33分裂胰島素原和des 31-32分裂胰島素原）。僅供研究使用。不用于診斷程序。

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總胰島素原ELISA試劑盒測試原理：

總胰島素原測定是一種雙位點夾心免疫測定法，使用一種特定的固相抗體，該抗體固定在微孔板的表面，以及一種用辣根過氧化物酶標記的可溶性抗體。樣本與緩沖液共同在微孔板中孵育，經(jīng)過洗滌步驟后，添加標記抗體溶液。在第二次孵育后，再進行一次洗滌步驟以去除未結(jié)合的標記抗體，然后進行測量。通過向每個孔中添加底物來定量固定的酶標記。經(jīng)過簡短的孵育后，通過添加終止溶液來終止反應。在板式閱讀器中測量450納米處的吸光度。

試劑準備、儲存和穩(wěn)定性：

在2-8°C下儲存，未開封的試劑將保持活性直至有效期。不要使用超過此日期的試劑。開封后的試劑必須存放在2-8°C。微孔板也必須存放在2-8°C。一旦鋁箔袋被打開，應當小心再次緊密封閉。如果按照上述描述儲存，已開封的試劑盒保持活性兩個月。標準品和對照品：通過添加1毫升去離子水來重懸每個標準品和對照品。讓它們靜置5分鐘，然后輕輕混合以確保所有固體溶解。重懸后的標準品和對照品可以在2-8°C下儲存最多兩周。HRP結(jié)合物：將含有HRP結(jié)合物濃縮液（1.0毫升）的全部內(nèi)容轉(zhuǎn)移到結(jié)合物稀釋液瓶中（11毫升）（1/12稀釋）并徹底混合。1X工作濃度的HRP結(jié)合物可以在2-8°C下儲存最多兩周。洗滌緩沖液：通過將1部分洗滌緩沖液濃縮液與29部分去離子水稀釋來準備1X工作濃度的洗滌緩沖液。1X工作濃度的洗滌緩沖液可以在2-8°C下儲存最多兩周。

樣本收集和儲存：

血漿或血清樣本。不要使用嚴重溶血的樣本。使用新鮮的血漿或樣本，并且避免進行超過兩次的凍融。儲存不當或經(jīng)過多次凍融的樣本可能會產(chǎn)生虛假結(jié)果。

樣本收集：

血漿：應將全血收集到含有EDTA或肝素抗凝劑的試管中，并在收集后立即離心。分離后應盡快將血漿冷凍并儲存在-20°C。

血清：應將全血收集到普通試管中，并讓其凝固30分鐘。應通過離心分離血塊。在操作過程中應注意避免溶血。

樣本儲存：

在測定前，樣本應冷凍儲存在-20°C。在測試前，已解凍的樣本應多次倒置。

典型標準曲線：

此曲線僅用于說明，不得用于計算結(jié)果。

結(jié)果計算：

結(jié)果可以通過曲線擬合軟件（例如4參數(shù)或三次樣條）自動計算。不同的數(shù)據(jù)處理函數(shù)可能會給出略有不同的結(jié)果。樣品的濃度可以直接從這個標準曲線上讀取。濃度高于最高標準品的樣品應該進一步稀釋并重新測試。在計算濃度時，必須考慮這個稀釋因子。

預期值：

強烈建議每個實驗室根據(jù)自己的情況確定正常和異常值。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉(zhuǎn)導、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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