ALPCO超敏胰島素ELISA用于定量測定人血清和血漿中的胰島素。

艾美捷超敏胰島素ELISA（ALP-80-CPTHU-E01.1）檢測原理：

ALPCO超敏感胰島素ELISA是一種夾心型免疫分析法。96孔微孔板涂有針對胰島素的單克隆抗體。標準品、樣本和對照品與檢測抗體一起加入微孔板孔中。然后，微孔板在室溫下以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度在微孔板振蕩器上孵育。第一次孵育完成后，用洗滌緩沖液清洗孔并吸干。加入TMB底物，微孔板在室溫下第二次在微孔板振蕩器上以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度孵育。第二次孵育完成后，加入停止溶液，并通過分光光度計在450 nm處測量光密度（OD）。產(chǎn)生的色度強度與樣本中胰島素的含量成正比。

供應(yīng)的材料：

Component Quantity Preparation

Insulin Microplate (96 wells) 12x8 strips Ready to use

Zero Standard (0 μlU/mL) 5 mL Ready to use

"Standards  (A-E)

(0.15,1,3,10,20  μlU/mL)" 1 mL each Ready to use

Diabetes Control Level 1* 1 vial each Lyophilized*

Detection Antibody 12 mL Ready to use

Wash Buffer Concentrate 40 mL 21X

TMB Substrate 12 mL Ready to use

Stop Solution 12 mL Ready to use

Plate Sealers 3 Ready to use

**請參閱每個試劑盒隨附的分析證書，了解批次特定的控制范圍和復(fù)溶量。

超敏胰島素ELISA測定程序：

使用前應(yīng)將所有試劑和微孔板條平衡至室溫（18-25°C）。使用前輕輕混合所有試劑。每次測定運行和每次使用多個微孔板時，都必須進行標準曲線測定。所有標準品、樣本和對照品都應(yīng)雙重測定。

1. 在打開鋁箔袋之前，應(yīng)將微孔板平衡至室溫。為標準品、對照品和樣本的雙重測定準備足夠的微孔板條。剩余的微孔板條應(yīng)存放在含有干燥劑的緊閉鋁箔袋中，儲存在2-8°C。

2. 分別向各自孔中移液25 ?L的標準品、對照品和樣本。參見試劑準備和分析證明書中的對照品重組說明。

3. 向每個孔中移液100 ?L的檢測抗體。

4. 用板封膜覆蓋微孔板，在室溫下振蕩孵育1小時，振蕩速度為700-900 rpm。

5. 倒掉孔中的內(nèi)容物，并使用微孔板洗滌器每次用350 ?L的工作強度洗滌緩沖液洗滌微孔板6次（參見試劑準備）。或者，使用配備洗滌噴嘴的洗滌瓶將工作強度洗滌緩沖液注入孔中。（不建議使用多通道移液器。必須用足夠且相等的力量分配洗滌緩沖液，以便正確洗滌孔。）在洗滌之間，將微孔板倒置以丟棄液體，并在吸水紙上用力拍打倒置的微孔板。在最后一次洗滌后（自動或手動），通過倒置并在吸水紙上用力拍打微孔板，從孔中去除任何殘留的洗滌緩沖液和氣泡。

6. 向每個孔中移液100 ?L的TMB底物。

7. 用板封膜覆蓋微孔板，在室溫下振蕩孵育30分鐘，振蕩速度為700-900 rpm。

8. 向每個孔中移液100 ?L的停止溶液，并輕輕搖晃微孔板以混合內(nèi)容物。在進行下一步之前去除任何氣泡。

9. 將微孔板放入能夠讀取450nm吸光度的微孔板讀取器中。在加入停止溶液后應(yīng)立即分析微孔板，且不得超過30分鐘。

超敏胰島素ELISA結(jié)果計算：

從標準品構(gòu)建標準曲線。零標準品應(yīng)作為空白，其平均值應(yīng)從每個孔中減去。建議使用軟件程序計算標準曲線并確定樣本的濃度。ALPCO超敏感胰島素ELISA是一種配體結(jié)合測定法，其響應(yīng)與分析物濃度呈S形關(guān)系。目前接受的此類曲線的參考模型使用4或5參數(shù)邏輯（pl）擬合，因為這些模型在更大范圍內(nèi)優(yōu)化了準確性和精確性。盡管三次樣條和其他模型是可接受的方法，但它們通常在低高端的范圍內(nèi)顯示出較低的測定內(nèi)準確性和精確性。

在以下示例中，使用了5-pl曲線擬合，以最大化低濃度樣本的準確性和精確性。然而，由于個別實驗室條件的影響，所有模型在可檢測范圍的最低和最高端的準確性和精確性都是有限的。因此，在解釋分析物響應(yīng)變得非線性的結(jié)果時，應(yīng)始終謹慎。

典標準曲線：

以下結(jié)果僅用于演示目的，不能代替通過測定獲得的數(shù)據(jù)。

超敏胰島素ELISA文獻參考：

Finlay JWA, Dillard RF. Appropriate Calibration Curve Fitting in Ligand Binding Assays. AAPS Journal. 2007; 9(2): E260-E267.