硫酸氨基葡萄糖是天然的氨基單糖，是人體關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)中合成蛋白聚糖所必需的重要成分。氨基單糖可刺激軟骨細(xì)胞產(chǎn)生具有正常多聚體結(jié)構(gòu)的糖蛋白，抑制某些可損害關(guān)節(jié)軟骨的酶(如膠原酶和磷脂酶A2)，抑制損傷細(xì)胞的超氧化物自由基的產(chǎn)生，防止皮質(zhì)激素及某些非甾體類抗炎藥對(duì)軟骨細(xì)胞的損害，減少損傷細(xì)胞的內(nèi)毒素因子的釋放。因此在研究過(guò)程中對(duì)于硫酸氨基葡萄糖的定量檢測(cè)對(duì)于某些疾病的診斷尤為重要。

今天艾美捷給大家?guī)?lái)一款Biocolor公司的專利產(chǎn)品用于檢測(cè)樣本中的硫酸氨基聚糖，這款試劑盒采用常規(guī)生化方法，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線和比色，可定量分析總硫酸化多糖（氨基聚糖和蛋白聚糖）的含量，亦可測(cè)定O端和N端硫酸氨基多糖的比值。主要起作用的是Blyscan染料，它可以特異性的與氨基聚糖和蛋白聚糖上的硫酸多糖組分結(jié)合，該方法不適于檢測(cè)已經(jīng)降解的硫酸化雙糖片段。

sGAG檢測(cè)試劑盒可檢測(cè)廣泛的蛋白多糖，可檢測(cè)的氨基多糖包括硫酸軟骨素、硫酸角質(zhì)素、硫酸皮膚素、硫酸肝素，不適合檢測(cè)包含海藻酸的樣品，因?yàn)樗鼈兒刑侨┧帷Ｔ撛噭┖幸膊荒軐?duì)透明質(zhì)酸定量，但透明質(zhì)酸并不會(huì)對(duì)硫酸化氨基多糖的檢測(cè)產(chǎn)生干擾。細(xì)胞培養(yǎng)基中20%的胎牛血清也不會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)。該方法檢測(cè)靈敏度為5ug，所需時(shí)間為1小時(shí)。

檢測(cè)樣本：可來(lái)自軟骨組織、動(dòng)脈組織、肺組織、皮膚組織、腫瘤組織、細(xì)胞核組織提取物、細(xì)胞培養(yǎng)液、羊水和尿液

Blyscan檢測(cè)流程圖：

sGAG檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟 ：

1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

2. 待測(cè)樣品的處理：

取50ul待測(cè)樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如果反應(yīng)物在656nm初的吸收峰大于1.5，則對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，待測(cè)樣樣品濃度落入標(biāo)準(zhǔn)曲線中段時(shí)，準(zhǔn)確度較高。

3. 硫酸氨基聚糖—染料復(fù)合物的獲得

加1.0ml的Blyscan染料溶液到待測(cè)樣本中，充分混勻，待不溶物出現(xiàn)，離心，棄上清，則獲得紫色的硫酸氨基聚糖—染料復(fù)合物

4. 硫酸氨基聚糖—染料復(fù)合物中染料的釋放

加入1.0ml的染料釋放劑，充分混勻。溶解5min以上，使染料充分釋放

5. 測(cè)定

用分光光度計(jì)于波長(zhǎng)656nm處測(cè)定，或使用colorimeter紅色濾光片測(cè)定

sGAG檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果展示：

產(chǎn)品推薦：

僅供科研使用，不得用于醫(yī)療.

sGAG檢測(cè)試劑盒已發(fā)表文章，超500篇，僅摘錄展示部分：

Ahn, G., Min, K., Kim, C., Lee, J., Kang, D., reports, J. W.-S., & 2017 Precise stacking of decellularized extracellular matrix based 3D cell-laden constructs by a 3D cell printing system equipped with heating modules. Nature.com.

Makris, E., & Responte, D. (2014). Developing functional musculoskeletal tissues through hypoxia and lysyl oxidase- induced collagen cross-linking. PNAS 111, E4832 E4841.

Prewitz,M.C., Seib,F.P., von Bonin,M., Friedrichs,J., Sti+ el,A., Niehage,C., M++ller,K., Anastassiadis,K., Waskow,C. and Hoflack,B. (2013) Tightly anchored tissue-mimetic matrices as instructive stem cell microenvironments. Nature Methods 10, 788 794

Song,J.J., Guyette,J.P., Gilpin,S.E., Gonzalez,G., Vacanti,J.P. and Ott,H.C. (2013) Regeneration and experimental orthotopic transplantation of a bioengineered kidney. Nature medicine, 19, 646-651.

看到這兒，您心動(dòng)了嗎？馬上聯(lián)系小艾吧！