程序性細(xì)胞死亡 (Programmed cell death, PCD) 是多細(xì)胞生物中，由基因調(diào)控的細(xì)胞自殺過程，常見的PCD包括細(xì)胞焦亡(Pyroptosis)、凋亡(Apoptosis)和自噬(Autophagy)。  

今天我們就來聊一聊細(xì)胞焦亡(Pyroptosis)。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生焦亡時，由于細(xì)胞膜破裂導(dǎo)致內(nèi)容物的釋放，會激活強烈的炎癥反應(yīng)。細(xì)胞焦亡激活的通路包括依賴Caspase-1的經(jīng)典途徑和依賴Caspase-4、5、11的非經(jīng)典途徑。  

依賴Caspase-1的細(xì)胞焦亡經(jīng)典途徑：

Caspase-1首先被激活，激活的Caspase-1切割Gasdermin D，生成含氮端活性域的肽段，該結(jié)構(gòu)域結(jié)合膜脂并在細(xì)胞膜上打孔，導(dǎo)致細(xì)胞滲透壓的變化，進而發(fā)生脹大直至細(xì)胞膜破裂。同時，活化的Caspase-1對IL-1β和IL-18的前體進行切割，形成有活性的IL-1β和IL-18，并釋放到胞外，募集炎癥細(xì)胞聚集，擴大炎癥反應(yīng)。  

依賴Caspase-4、5、11的細(xì)胞焦亡非經(jīng)典途徑：

通常是細(xì)胞質(zhì)脂多糖（lipopoly-saccharide，LPS）直接激活Caspase-4、Caspase-5和Caspase-11，活化的Caspase-4、5、11切割Gasdermin D產(chǎn)生與Caspase-1相同的裂解作用，從而導(dǎo)致細(xì)胞膜穿孔。

細(xì)胞焦亡與細(xì)胞凋亡相似，與細(xì)胞凋亡不同的是，細(xì)胞焦亡主要是由caspase-1激活的。因此檢測caspase-1活性是細(xì)胞焦亡分析的關(guān)鍵。  

美國ICT的用于細(xì)胞焦亡分析的Caspase-1檢測試劑盒利用FLICA?技術(shù)檢測Caspase-1活性。這些試劑盒包含caspase-1抑制劑，該抑制劑包含caspase-1的首選結(jié)合序列Tyr-Val-Ala-Asp (YVAD)。FLICA試劑FAM-YVAD-FMK（最佳激發(fā)波長為488-492 nm，最佳發(fā)射波長為515-535 nm），是無細(xì)胞毒性的，細(xì)胞膜滲透抑制劑。進入細(xì)胞，并不可逆地與活化的caspase-1結(jié)合。任何未結(jié)合的FAM-YVAD-FMK-FLICA試劑擴散出細(xì)胞并被沖走。因此留在細(xì)胞內(nèi)的綠色熒光直接體現(xiàn)了活性caspase-1酶活性的。熒光結(jié)果可通過熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀進行分析。

* 僅供科研使用，不得用于醫(yī)療. 

用陰性對照(非誘導(dǎo)的，A)或5 ng/mL的佛波酯PMA誘導(dǎo)處理的THP-1細(xì)胞，使其成為巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞(誘導(dǎo)的，B)。48小時后，從誘導(dǎo)種群中去除PMA，用含有10 ng/mL LPS的新鮮培養(yǎng)基替代，誘導(dǎo)caspase-1激活。2小時后，細(xì)胞被FAM-YVAD-FMK染色1小時，清洗，并在顯微鏡下觀察。在誘導(dǎo)的樣品中，許多細(xì)胞呈現(xiàn)亮綠色，表明caspase-1活性水平增加(B，誘導(dǎo)，右)。在非誘導(dǎo)的樣品中，很少可見綠色細(xì)胞，表明caspase-1活性水平較低(a，非誘導(dǎo)，左)。   

美國ICT除了可提供全面的細(xì)胞活性檢測相關(guān)試劑，包括凋亡、 caspase、 自噬、細(xì)胞毒性、壞死等相關(guān)檢測，還可以同時提供高質(zhì)量高靈敏度的 ELISA以及相關(guān)試劑，包括包被液、封閉液、 沖洗液、 底物、 終止液、 板子等等。 —————————————————————————————————————————— 

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