細(xì)胞滲透性鈣離子指示劑 · 高靈敏度 · 低毒性

Calbryte 520 AM 是AAT Bioquest公司開發(fā)的一種細(xì)胞滲透性熒光鈣離子（Ca²⁺）指示劑，貨號(hào)為 20650。該產(chǎn)品主要用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)活細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度動(dòng)態(tài)變化，具有高靈敏度、低毒性以及與多種熒光探針兼容的特點(diǎn)。

·主要用途：實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)活細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的動(dòng)態(tài)變化

·適用領(lǐng)域：心血管研究、神經(jīng)科學(xué)、腫瘤學(xué)、免疫學(xué)等

化學(xué)性質(zhì)與工作原理

化學(xué)結(jié)構(gòu)：

Calbryte 520 AM 為乙酰氧基甲酯（AM）衍生物，可通過被動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞。細(xì)胞內(nèi)酯酶水解 AM 基團(tuán)后，釋放出游離的 Calbryte 520 熒光團(tuán)，與 Ca?? 結(jié)合后熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。

光譜特性：

1. 激發(fā)波長（λEx）：488 nm（與藍(lán)光激光兼容）

2. 發(fā)射波長（λEm）：515–540 nm（綠色熒光范圍）

3. 信號(hào)增強(qiáng)：與 Ca?? 結(jié)合時(shí)熒光信號(hào)可提升超過 100 倍，信噪比（SNR）高

親和力特點(diǎn)：

Calbryte 520 對(duì) Ca?? 的親和力較低（Kd 約為 1–2 μM），適合檢測(cè)快速、高幅度的鈣瞬變，避免高親和力染料（如 Fura-2）的飽和問題。

核心優(yōu)勢(shì)：

? 長時(shí)程穩(wěn)定性：相較于 Fluo-4 AM 等傳統(tǒng)染料，Calbryte 520 AM 在細(xì)胞內(nèi)保留時(shí)間長達(dá) 24 小時(shí)，無需添加有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑（如 probenecid）。

? 多通道兼容性：其光譜特性使其可與紅色熒光探針（如 R-CEPIA1SR，用于肌質(zhì)網(wǎng)鈣成像）同時(shí)使用，實(shí)現(xiàn)雙通道鈣信號(hào)監(jiān)測(cè)。

? 高靈敏度與低背景：水解后的熒光團(tuán)與 Ca²⁺結(jié)合時(shí)產(chǎn)生明亮的熒光信號(hào)，背景干擾小，適用于活細(xì)胞動(dòng)態(tài)成像。

應(yīng)用場(chǎng)景與實(shí)驗(yàn)案例

1. 心血管研究

心肌細(xì)胞鈣動(dòng)力學(xué)

用于人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞分化心肌細(xì)胞（hiPSC-CMs）的胞質(zhì)鈣濃度監(jiān)測(cè)，結(jié)合 R-CEPIA1SR 探針同步檢測(cè)肌質(zhì)網(wǎng)鈣釋放，研究心律失常機(jī)制（如兒茶酚胺敏感性多形性室速，CPVT）。

鈣瞬變與動(dòng)作電位同步記錄

與膜電位探針 FluoVolt 聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)鈣信號(hào)（Calbryte 520）與動(dòng)作電位（FluoVolt）的雙通道光學(xué)映射（100–1000 fps）。

2. 神經(jīng)科學(xué)

神經(jīng)元光熱刺激研究

在 Ti3C2Tx MXene 材料介導(dǎo)的神經(jīng)刺激實(shí)驗(yàn)中，Calbryte 520 AM 用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)背根神經(jīng)節(jié)（DRG）神經(jīng)元在光熱刺激下的鈣內(nèi)流，驗(yàn)證神經(jīng)興奮性。

鈣信號(hào)與凋亡關(guān)聯(lián)研究

在巨噬細(xì)胞中，通過鈣成像分析炎癥或藥物處理后的鈣響應(yīng)。

3. 腫瘤與免疫學(xué)

腫瘤細(xì)胞鈣通量檢測(cè)

用于評(píng)估電磁場(chǎng)（如 5 mT 低頻磁場(chǎng)）對(duì)腫瘤細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的影響，揭示其抑制腫瘤生長的機(jī)制。

免疫細(xì)胞激活分析

在骨髓中性粒細(xì)胞（BMNs）中，監(jiān)測(cè) PAF（血小板活化因子）刺激下的鈣信號(hào)動(dòng)態(tài)，研究藥物（如人參皂苷 Rg5）的調(diào)控作用。

4. 骨與組織工程

成骨細(xì)胞鈣響應(yīng)

在電磁治療（EMTT）研究中，Calbryte 520 AM 用于檢測(cè)骨祖細(xì)胞（hOBs）內(nèi)鈣濃度的升高，驗(yàn)證電場(chǎng)促進(jìn)骨礦化的機(jī)制。

實(shí)驗(yàn)操作指南

1. 染料配制：將 Calbryte 520 AM 溶于含 0.04% Pluronic F-127 的緩沖液（如 HBSS 或 KRP-HEPES），終濃度通常為 5 μM。

2. 孵育條件：37°C 避光孵育 30–60 分鐘，隨后室溫平衡 15–30 分鐘以促進(jìn)酯酶水解。

3. 洗滌與成像：用緩沖液洗滌 3 次后，在熒光顯微鏡或微孔板讀數(shù)儀（激發(fā)/發(fā)射：490/525 nm）中觀察信號(hào)。

注意事項(xiàng)

·避免長時(shí)間光照，防止光漂白。

·實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中需設(shè)置陰性對(duì)照（如未染色細(xì)胞）和陽性刺激（如離子霉素）以驗(yàn)證染料響應(yīng)。

總結(jié)

Calbryte 520 AM 憑借其長時(shí)程穩(wěn)定性、低背景噪聲和廣泛兼容性，成為活細(xì)胞鈣成像的首選工具之一。無論是心血管疾病機(jī)制研究、神經(jīng)興奮性調(diào)控，還是腫瘤治療新策略開發(fā)，該產(chǎn)品均展現(xiàn)出強(qiáng)大的應(yīng)用潛力。歡迎垂詢，AAT Bioquest中國區(qū)總代理，艾美捷科技！