大家小長(zhǎng)假或者放假在家，沒(méi)事應(yīng)該都會(huì)刷刷電視劇，來(lái)消磨時(shí)間....啊不對(duì)，是放松身心，讓我們的身體通過(guò)娛樂(lè)獲得滿滿的能量~~ 不過(guò)呢，我們娛樂(lè)完了要開始學(xué)習(xí)啦，今天我們繼續(xù)給大家放送表觀遺傳相關(guān)的產(chǎn)品，前面兩集是關(guān)于表觀遺傳之DNA甲基化的，今天給大家?guī)?lái)表觀遺傳之RNA甲基化。

      前面給大家講了DNA甲基化，DNA甲基化是通過(guò)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶在胞嘧啶環(huán)的第5個(gè)碳原子上共價(jià)加成甲基而產(chǎn)生的，從而產(chǎn)生5-甲基胞嘧啶（5-mC）。那么什么又是RNA甲基化呢？

       一 RNA甲基化相關(guān)概念

      RNA甲基化是RNA的可逆翻譯后修飾，其表觀遺傳地影響許多生物過(guò)程。它發(fā)生在不同的RNA中，包括tRNA，rRNA，mRNA，tmRNA，snRNA，snoRNA，miRNA和病毒RNA。不同的RNA-甲基轉(zhuǎn)移酶具備相應(yīng)的催化策略，用于RNA甲基化。

      RNA甲基化主要的修飾類型有兩三種：一種是6-甲基腺嘌呤（m6A），是在存在于真核生物的RNA分子中最常見的和豐富的甲基化修飾和占所有RNA甲基化的80％以上。它可以被稱為“第五RNA堿基”并且在調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育和細(xì)胞命運(yùn)中具有廣泛的作用。

      另一種是5-mC，5-甲基胞嘧啶（5-mC）是一種表觀遺傳標(biāo)記，通常也出現(xiàn)在各種RNA分子中。有證據(jù)表明，RNA胞嘧啶甲基化會(huì)影響各種生物學(xué)過(guò)程，例如RNA穩(wěn)定性和mRNA翻譯。

      最后一種是m1A RNA甲基化，它普遍存在于非編碼RNA和mRNA中。m1A RNA甲基化功能，目前發(fā)現(xiàn)tRNA上發(fā)生多種m1A修飾，可能參與翻譯調(diào)控。

      今天就跟大家講講RNA m6A甲基化。

       二 m6A甲基化

      N6-甲基腺苷（m6A）-真核生物中存在的RNA分子中最常見和最豐富的甲基化修飾。 被稱為“第五個(gè)RNA堿基”的m6A RNA修飾是可逆的，高度動(dòng)態(tài)的，并且可能起著與DNA甲基化和組蛋白修飾相當(dāng)?shù)闹匾飳W(xué)作用。

      Epigentek可提供m6A研究相關(guān)的產(chǎn)品，主要有m6A RNA定量試劑盒，甲基化酶和去甲基化酶活性/抑制劑分析試劑盒，以及相關(guān)的抗體。

【操作指南】m6A RNA甲基化定量檢測(cè)試劑盒（cat#P-9005）

      【1】m6A RNA甲基化定量檢測(cè)試劑盒

      【2】Epigenase m6A甲基酶活性/抑制分析試劑盒

      【3】m6A RNA甲基化抗體

      圖左：The N6-methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody tested in dot blot against total RNA of Arabidopsis

      圖右ELISA performed at1:1000 dilution usingN6-methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody

      圖左：The m6A rabbit monoclonal antibody was tested in Dot Blot against N6-methyladenosine (m6A) and unmodified adenosine.

      Oligomer 8 -ATAACTGG-m6ACCGAATGG

      Oligomer 9 -ATAACTGGACCGAATGG

      Oligomer 10 -AAAAAAAAAAAAAAAAbiotin.

      圖右：U2OS cells pre-treated with BrdU were subjected to UVC irradiation incubated at 37 °C for the indicated time, and stained for N6-methyladenosine (m6A) Monoclonal Antibody. DAPI, 4’, 6-diamidino-2-phenylindole. Global UVC irradiation exceed cytoplasmic level, peaking at 2 min after irradiation and diminishing over the following 8 min.

      【4】MeRIP & m6A-seq產(chǎn)品

      通過(guò)富集存在少量m6A的部分基因組來(lái)鑒定m6A修飾。 然后通過(guò)構(gòu)建文庫(kù)，為下一代測(cè)序準(zhǔn)備這些片段。 我們獨(dú)特的方法稱為CUT＆RUN RNA m6A富集（在目標(biāo)下切割，并使用核酸酶富集RNA m6A進(jìn)行回收），僅在抗體結(jié)合位置分離RNA片段，同時(shí)在目標(biāo)下捕獲和切割。 這種簡(jiǎn)化的過(guò)程僅需幾個(gè)小時(shí)即可將RNA提取到cDNA文庫(kù)。

      p-9018 EpiQuik CUT&RUN m6A RNA Enrichment Kit ：基于CUT＆RUN的MeRIP可提高特異性和信號(hào)。

      p-9016 EpiNext CUT&RUN RNA m6A-Seq Kit：基于CUT＆RUN的一體式MeRIP和NGS庫(kù)準(zhǔn)備。

      參考文獻(xiàn)：

      Tsuruta K. et. al. et. al. (September 2020). RNA N6-methyladenosine demethylase FTO regulates PD-L1 expression in colon cancer cellsBiochemical and Biophysical Research Communications. 530(1)  p-9005

      Zeng M et. al. (August 2020). Critical roles of mRNA m⁶A modification and YTHDC2 expression for meiotic initiation and progression in female germ cells. 753:144810. p-9008

      以上就是今天的全部?jī)?nèi)容了啦~~

      下期預(yù)告：RNA甲基化——5mC甲基化，大家敬請(qǐng)期待噢~~

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