ALPCO小鼠C肽ELISA用于定量測定小鼠血清中的C肽。

艾美捷ALPCO-c肽(小鼠)ELISA試劑盒，96孔（ALP-80-CPTMS-E01）檢測原理：

ALPCO小鼠C肽ELISA是一種夾心型免疫測定法。96孔微孔板涂有C肽特異性單克隆抗體。將標(biāo)準(zhǔn)品、對照品和樣品加入到帶有共軛物的微孔板孔中。然后將微孔板在室溫下在微孔板振蕩器上以700-900rpm的速度孵育。第一次孵育完成后，用洗滌緩沖液洗滌細胞并吸干。加入TMB底物，在室溫下在微孔板振蕩器上以700-900rpm第二次孵育微孔板。第二次孵育完成后，加入終止溶液，用分光光度計在450nm處測量光密度（OD）。產(chǎn)生的顏色強度與樣品中C肽的量成正比。

c肽(小鼠)ELISA試劑盒測定程序：

所有試劑和微孔板條在使用前應(yīng)平衡至室溫（18-25°C）。使用前輕輕混合所有試劑。每次測定運行和每次使用多個微孔板時，都必須執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)曲線。所有標(biāo)準(zhǔn)品、對照品和樣本都應(yīng)雙重運行。

1. 在打開鋁箔袋前，應(yīng)先將微孔板平衡至室溫。為標(biāo)準(zhǔn)品、對照品和樣本的雙重測定分配足夠的微孔板條。其余的微孔板條應(yīng)存放在含干燥劑的密封鋁箔袋中，置于2-8°C。

2. 將每個標(biāo)準(zhǔn)品、對照品和樣本的10微升分別吸入相應(yīng)的孔中。見試劑準(zhǔn)備和分析證書上的對照品重組說明。

3. 向每個孔中加入100微升的工作強度結(jié)合物（見試劑準(zhǔn)備）。

4. 用板封膜覆蓋微孔板，在室溫下孵育2小時，在微孔板振蕩器上以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度搖動。

5. 倒掉孔中的內(nèi)容物，使用微孔板洗滌器用每次350微升的工作強度洗滌緩沖液洗板3次（見試劑準(zhǔn)備）。或者，使用帶有洗滌噴嘴的洗滌瓶將工作強度洗滌緩沖液注入孔中。（不建議使用多通道移液管。洗滌緩沖液必須以足夠且均衡的力量分配，以便正確洗滌孔。）每次洗滌之間，將微孔板倒置以丟棄液體，并在吸水紙上用力拍打倒置的微孔板。在最后洗滌后（自動或手動），通過倒置并用力拍打微孔板在吸水紙上，去除孔中的任何殘留洗滌緩沖液和氣泡。

6. 向每個孔中加入100微升的TMB底物。

7. 用板封膜覆蓋微孔板，在室溫下孵育10分鐘，在微孔板振蕩器上以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度搖動。

8. 向每個孔中加入100微升的終止溶液，并輕輕搖動微孔板以混合內(nèi)容物。在進行下一步之前，去除任何氣泡。

9. 將微孔板放入能夠讀取450納米吸光度的微孔板閱讀器中。在加入終止溶液后應(yīng)立即分析微孔板，且不得超過30分鐘。

c肽(小鼠)ELISA試劑盒結(jié)果的計算：

構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：

從標(biāo)準(zhǔn)品中構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。將零標(biāo)準(zhǔn)作為曲線的一部分。建議使用軟件程序來計算標(biāo)準(zhǔn)曲線并確定樣本的濃度。小鼠C肽ELISA是一種配體結(jié)合測定，其響應(yīng)與分析物濃度呈現(xiàn)S形關(guān)系。目前被普遍接受的此類曲線的參考模型使用5參數(shù)邏輯（pl）擬合，因為這些模型可以在更大的范圍內(nèi)優(yōu)化準(zhǔn)確性和精確度。盡管三次樣條和其他模型是可以接受的方法，但它們通常在范圍的低端和高端顯示出較低的測定內(nèi)準(zhǔn)確性和精確度。在以下示例中，使用了5參數(shù)邏輯擬合來最大化低濃度樣本的準(zhǔn)確性和精確度。然而，由于個別實驗室條件的影響，所有模型在可檢測范圍的最低端和最高端的準(zhǔn)確性和精確度都是有限的。因此，在解釋分析物響應(yīng)變得非線性時所得出的結(jié)果時，應(yīng)始終謹慎。

不建議將樣本濃度值外推至標(biāo)準(zhǔn)濃度值范圍之外。

典型標(biāo)準(zhǔn)曲線：

以下結(jié)果僅供演示目的，不能代替實際測定所得數(shù)據(jù)。每次測定運行和板測試時都必須執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)曲線。將摩爾值轉(zhuǎn)換為納克/毫升：320.3皮摩爾 = 1納克/毫升。