ALPCOc肽(小鼠)ELISA試劑盒（ALP-80-CPTMS-E01），是一種夾心型免疫測定法。96孔微孔板涂有C肽特異性單克隆抗體。將標(biāo)準(zhǔn)品、對照品和樣品加入到帶有共軛物的微孔板孔中。然后將微孔板在室溫下在微孔板振蕩器上以700-900rpm的速度孵育。第一次孵育完成后，用洗滌緩沖液洗滌細(xì)胞并吸干。加入TMB底物，在室溫下在微孔板振蕩器上以700-900rpm第二次孵育微孔板。第二次孵育完成后，加入終止溶液，用分光光度計在450nm處測量光密度（OD）。產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度與樣品中C肽的量成正比。

ALPCO小鼠C肽ELISA用于定量測定小鼠血清中的C肽。

艾美捷ALPCO-c肽(小鼠)ELISA試劑盒所需材料：

- 用于分配高達(dá)100微升的精密移液管（帶一次性吸頭）

- 用于分配高達(dá)100微升的可重復(fù)或多通道移液管

- 用于試劑配制的容量瓶和移液管

- 用于試劑配制的蒸餾水或去離子水

- 微孔板洗滌器或洗滌瓶

- 能夠達(dá)到700-900轉(zhuǎn)/分鐘的微孔板振蕩器

- 帶有450納米濾光片的微孔板閱讀器

- 用于樣本制備的渦旋混合器。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒中包含的人類血液產(chǎn)品已針對HIV（人類免疫缺陷病毒）、HBV（乙型肝炎病毒）和HCV（丙型肝炎病毒）的存在進(jìn)行了檢測。這些病毒的檢測方法不能保證病毒的絕對不存在；因此，所有試劑應(yīng)被視為潛在的感染性物質(zhì)。處理和處置應(yīng)符合所有適當(dāng)?shù)膰液偷胤椒ㄒ?guī)，以處理潛在的生物危害物質(zhì)。

2. 所有來源于動物的材料均為BSE（牛海綿狀腦病）陰性。然而，所有材料應(yīng)遠(yuǎn)離反芻動物。

3. 避免與皮膚直接接觸。

4. 本產(chǎn)品不適用于內(nèi)服。

5. 使用本產(chǎn)品時，避免進(jìn)食、飲水或吸煙。

6. 不要使用嘴來移液任何試劑。

7. 試劑盒中的試劑是特定批次的，不得替代。

8. 不要使用超過有效期的試劑。

9. 不建議對測試程序進(jìn)行變動，可能會影響測試結(jié)果。

儲存條件：

試劑盒應(yīng)儲存在2-8°C的條件下。試劑盒在盒子標(biāo)簽上的有效期之前是穩(wěn)定的。

樣本處理：

血清樣本適用于本測定。不需要對樣本進(jìn)行稀釋或處理。然而，如果樣本的C肽濃度高于最高標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)將樣本稀釋在零標(biāo)準(zhǔn)中，并重復(fù)分析。建議1）在使用前徹底渦旋每個樣本，2）在不停頓的情況下進(jìn)行移液操作。將C肽樣本分裝后存放在≤-20°C的條件下。樣本可以經(jīng)歷多達(dá)4次凍融循環(huán)。

結(jié)果計算：

從標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。將零標(biāo)準(zhǔn)作為曲線的一部分進(jìn)行繪制。建議使用軟件程序來計算標(biāo)準(zhǔn)曲線并確定樣本的濃度。小鼠C肽ELISA是一種配體結(jié)合測定，其反應(yīng)與分析物濃度呈S形關(guān)系。目前公認(rèn)的此類曲線的參考模型使用5參數(shù)邏輯（pl）擬合，因?yàn)檫@些模型能在更大范圍內(nèi)優(yōu)化準(zhǔn)確性和精確度。盡管三次樣條和其他模型是可接受的方法，但它們通常在檢測范圍的低值和高值端顯示出較低的測定內(nèi)準(zhǔn)確性和精確度。在下面的例子中，使用了5參數(shù)pl曲線擬合來最大化低濃度樣本的準(zhǔn)確性和精確度。然而，由于個別實(shí)驗(yàn)室條件的影響，所有模型在可檢測范圍的最低和最高端的準(zhǔn)確性和精確度都是有限的。因此，在解釋分析物響應(yīng)變得非線性時的結(jié)果時，應(yīng)始終謹(jǐn)慎。

短期測定方案：

文獻(xiàn)參考：

1. Finlay JWA, Dillard RF. Appropriate Calibration Curve Fitting in Ligand Binding Assays. AAPS Journal. 2007; 9(2): E260-E267.