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碳酸酐酶(CA)催化CO2/H2CO3的可逆水合和脫水反應(yīng)。CA在自然界中廣泛存在,存在于動(dòng)物、植物和某些細(xì)菌中。在哺乳動(dòng)物中已經(jīng)鑒定并表征了16種同工酶。由于紅細(xì)胞CA相對(duì)容易獲得用于實(shí)驗(yàn)?zāi)康模虼怂茄芯孔顝V泛的。


特異性:
血液中CO2的運(yùn)輸和排泄在很大程度上依賴于紅細(xì)胞內(nèi)CA對(duì)CO2反應(yīng)的快速催化(Tufts等人2003年)。牛CA可逆地水合烷基丙酮酸酯,并對(duì)多種底物表現(xiàn)出水合酶活性(Pocker等人1974年,Wells等人1975年)。
組成:
迄今為止在哺乳動(dòng)物中已描述了十六種CA同工酶。紅細(xì)胞CA,CA-I和CA-II最為知名。CA-I、CA-II、CA-III、CA-VII和CA-XIII是細(xì)胞質(zhì)型的。CA-IV、CA-IX、CA-XII、CA-XIV和CA-XV是膜結(jié)合型的。CA-VI分泌在唾液中。CA-VA和CA-VB是線粒體的。還有三種無(wú)催化活性的形式,稱(chēng)為CA相關(guān)蛋白(CARPs):CARP-VIII、CARP-X和CARP-XI(Coban等人2009年)。
鋅金屬總是與組氨酸93、95和118(成熟鏈編號(hào))結(jié)合。一個(gè)氫鍵網(wǎng)絡(luò),與鋅結(jié)合的水分子和這些組氨酸直接或間接相連,包括28-Ser、91-Glu、105-Glu、106-His、116-His、193-Tyr、198-Thr、208-Trp和223-Asn。這些殘基被發(fā)現(xiàn)是高度保守的(Lindskog1982年,Lindskog等人1984年)。牛和人的CA I和II包含一個(gè)獨(dú)特的C末端結(jié)結(jié)構(gòu),已被證明對(duì)酶活性和機(jī)械特性很重要(Alam等人2002年)。
分子特征:
紅細(xì)胞中的每種同工酶(CA-I和CA-II)由一個(gè)由259或260個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈肽組成。低活性形式(CA-I)包含260個(gè)殘基,而高活性形式(CA-II)包含259個(gè)殘基。給定物種中紅細(xì)胞的高活性和低活性形式通常顯示出超過(guò)50%的序列同一性;例如,馬CA-I和CA-II形式僅顯示出55%的同一性(Wendorff等人1985年)。相比之下,不同物種中相同形式的同工酶顯示出更大的同源性;人的CA-II和牛CA-II顯示出77%的序列同源性(Tashian等人1980年,Engberg等人1985年,Alam等人2003年)。這些同工酶由不同的基因編碼,但由于在活性中心的大量同源性,它們似乎有共同的進(jìn)化歷史。泛素,一個(gè)76個(gè)殘基的蛋白質(zhì),具有一些CA的酶特性,與CA有獨(dú)特的序列同源性(Deutsch1987年)。
碳酸酐酶的特性:
CATH分類(lèi)
類(lèi)別:Alpha Beta
拓?fù)洌禾妓狒窱I
分子量:
29.0 kDa(理論)
30 kDa(Lindskog等人1971年)
最佳pH值:7.0-7.5(Demir等人2000年,Tasgin等人2009年)
等電點(diǎn):6.40(理論)
艾美捷Worthington 碳酸酐酶(9001-03-0)的應(yīng)用:
血液中CO2的測(cè)定
酸度測(cè)試試劑中CO2的消除
羧基轉(zhuǎn)移
還原反應(yīng)
消光系數(shù):
50,070 cm-1M-1(理論)
E1%, 280 = 19.0(Nyman和Lindskog1964年)
活性位點(diǎn)殘基
組氨酸(H63)
天冬氨酸(N66)
賴氨酸(K126)
激活劑:
HPO42-(Rowlett等人1991年)
SO32-(Rowlett等人1991年)
抑制劑:
單價(jià)陰離子(Lindskog等人1971年,Ward和Cull1972年)
磺酸鹽和磺胺類(lèi)(Pocker和Watamori1973年,Binford等人1974年)
咪唑(Edsall1968年)
文獻(xiàn)參考:
Andersson, B. , Nyman, P. and Strid, L.
Amino Acid Sequence of Human Erythrocyte Carbonic Anhydrase B , Biochem Biophys Res Commun 48 , 670 , 1972
Appleton, D. and Sarkar, B.
The Activity-Related Ionization in Carbonic Anhydrase , Proc Natl Acad Sci U S A 71 , 1686 , 1974
Behravan, G. , Jonsson, B. and Lindskog, S.
Fine Tuning of the Catalytic Properties of Carbonic Anhydrase - Studies of a Thr200 --> His Variant of Human Isoenzyme II , Eur J Biochem 190 , 351 , 1990
Behravan, G. , Jonsson, B. and Lindskog, S.
Fine Tuning of the Catalytic properties of Human Carbonic Anhydrase-II-Effects of Varying Active-Site Residue-200 , Eur J Biochem 195 , 393 , 1991
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