【前情回顧】無需超聲，Epigentek酶解法ChIP檢測試劑盒（CUT&LUNCH）上新啦！

為什么還要花費數(shù)天來完成傳統(tǒng)的CUT&RUN或ChIP分析？有了EpigenTek全新的CUT&LUNCH試劑盒，您只需一個上午2小時的時間，就能高效富集目標蛋白/DNA復合物，而無需在流程操作上費周章。 快速操作流程：在不到2小時內(nèi)完成實驗。 低非特異性背景：非特異性DNA結(jié)合僅為3-5%。 高特異性與高分辨率：在靶蛋白富集區(qū)域的兩端選擇性切割DNA。 成本效益高：與傳統(tǒng)CUT&RUN相比，每次反應(yīng)成本僅約為一半。 無縫整合現(xiàn)有流程：富集的DNA可直接用于NGS分析，可與現(xiàn)有且成熟的ChIP-seq生物信息學軟件和工具無縫對接。 不再讓冗長的實驗步驟耽誤您的工作進度。選擇CUT&LUNCH，在滿足時間和預(yù)算需求的前提下，獲得高效且高質(zhì)量的實驗結(jié)果。讓您的蛋白/DNA復合物富集更輕松省時，午餐前兩小時就能搞定！

準備好加速您的染色質(zhì)研究了嗎？ EpiNext CUT&LUNCH（Cleavage Under Target and Liberate Unique Nucleic Complex Homogenously）是一種新創(chuàng)的靶蛋白-DNA復合體定向切割與特異捕獲技術(shù)，快速靶蛋白/DNA復合體富集 。基于該技術(shù)制備的試劑盒綜合了ChIP和CUT&RUN的所有優(yōu)勢并克服其缺陷，可在最短時間內(nèi)實現(xiàn)靶向蛋白/DNA復合物的富集。上午10點開始試驗，12點完成，在午餐前就輕松搞定。

超快速三步法 超快速三步法示意圖：

1. 蛋白-DNA復合體與抗體結(jié)合；

2. 靶向復合體定向酶切割；

3. 選擇性捕獲抗體結(jié)合的靶蛋白-DNA復合體 (add the images)

EpiNext CUT&LUNCH（Cleavage Under Target and Liberate Unique Nucleic Complex Homogeneously）分析試劑盒（貨號P-2035）為研究體內(nèi)DNA-蛋白相互作用提供了一種快速高效的方法。它整合了ChIP和CUT&RUN的所有優(yōu)點，同時有效克服其局限性。

CUT&LUNCH分析具有如下優(yōu)勢與特點：

1 超快速三步法： 直接從完整細胞開始原位操作，無需ConA固定。整個流程僅需1小時50分鐘，有效減少細胞核損傷與染色質(zhì)丟失，同時保持天然染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。

2 增強特異性與降低背景： 獨特的核酸切割酶可在不影響蛋白結(jié)合DNA的前提下，于靶蛋白/DNA復合物兩端選擇性切割DNA，從而降低低序列偏好性和實現(xiàn)高特異性。非特異性蛋白-DNA復合物被有效清除，為目標蛋白富集區(qū)域的高分辨率定位提供保障。

3 低起始材料要求： 無論是游離DNA的高效切割還是免疫捕獲步驟，都能在最短時間內(nèi)完成。該方法既適用于細胞也適用于組織，并最大限度地保護目標蛋白不被降解，同時將樣本損失降至最低。因此，起始細胞數(shù)可低至500個。

4 廣泛適用性： 適用于多種培養(yǎng)細胞和新鮮或冷凍組織，并適用于多種物種。無論是組蛋白還是轉(zhuǎn)錄因子，都能在保持高特異性與靈敏度的前提下進行分析。

5 高度便捷： 試劑盒包含完成實驗所需的全部組分，使EpiNext? CUT&LUNCH分析既方便又具成本效益。

6 無縫整合進現(xiàn)有分析流程： 富集的DNA可直接用于NGS測序，并可用現(xiàn)有、成熟的ChIP-seq生物信息學軟件和工具進行分析。

左圖：使用EpiNext CUT&LUNCH試劑盒進行目標蛋白/DNA富集：通過陽性對照抗體（H3K4me3）從20萬個MCF-7細胞中捕獲組蛋白/DNA復合物。非免疫IgG作為陰性對照。富集的DNA被純化并通過Qubit熒光定量或通過針對GAPDH啟動子的qPCR分析進行富集倍數(shù)比較。右圖：顯著降低非特異性背景：CUT&LUNCH為5%，而CUT&RUN為30%，ChiP為20%。

CUT&LUNCH試劑盒（貨號P-2035）包含完成從各種細胞樣本中富集特定蛋白（組蛋白或高親和力結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子）相關(guān)DNA復合物所需的全部試劑，通過qPCR或NGS對蛋白與DNA的相互作用進行分析。在本實驗中，細胞首先被穿透化，并加入針對靶蛋白的高質(zhì)量ChIP級抗體。然后利用獨特的核酸切割酶混合物，對目標染色質(zhì)區(qū)域兩端的DNA進行特異性切割和去除。游離的非特異性蛋白-DNA復合物被清除，而結(jié)合有抗體的復合物將被選擇性保留。最后，對捕獲的蛋白/DNA復合物中的DNA片段進行純化，可直接用于特定基因位點的qPCR分析或DNA文庫構(gòu)建，從而對蛋白與DNA的相互作用進行全基因組水平的精確解析。 起始材料 起始材料可為各種哺乳動物細胞，包括培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)細胞、原代細胞、從血液或體液中分離的稀有細胞群、新鮮/冷凍組織中的細胞、以及從整體細胞群或胚胎細胞中分選得到的特定細胞類型等。每次反應(yīng)的細胞數(shù)可在2 x 10^3至5 x 10^5之間。為獲得最佳效果，推薦使用2 x 10^5個細胞作為起始量，但對修飾組蛋白的檢測最低可至500個細胞。

CUT&LUNCH對比傳統(tǒng)CUT&RUN和ChIP的優(yōu)勢

EpigenTek開發(fā)的改良型CUT&RUN技術(shù)——CUT&RUN-Fast，采用了一種新型獨特的核酸切割酶混合物。該酶對序列偏好性極低，可同時對靶蛋白/DNA復合物兩端的染色質(zhì)進行切割和去除，并在不影響目標蛋白占位DNA的情況下，提升特異性和分辨率。這一改進大大加快了實驗進程，無需過夜孵育。EpigenTek在CUT&RUN-Fast基礎(chǔ)上進一步升級推出的CUT&LUNCH試劑盒，在極短的操作流程中實現(xiàn)了更高的特異性和更低的背景信號，讓您可以在保持高特異性和高分辨率的前提下，大幅縮短實驗時間并降低成本。