用于使用人血清通過酶免疫測定法直接定量測定游離甲狀腺素。僅供研究使用。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品游離甲狀腺素(游離T4) ELISA試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

游離甲狀腺素(游離T4) ELISA試劑盒檢測原理

ALPCO游離甲狀腺素（游離T4）ELISA是一種競爭性免疫測定法。競爭發(fā)生在未標記抗原（存在于標準品、對照品和樣品中）和酶標記抗原（結合物）之間，爭奪微孔板上有限數(shù)量的抗體結合位點。洗滌和潷析程序可以去除未結合的物質。洗滌步驟后，加入酶底物。通過加入終止溶液終止酶促反應。吸光度在微孔板讀數(shù)器上測量。形成的顏色強度與樣品中游離甲狀腺素（fT4）的濃度成反比。一組標準用于繪制標準曲線，從中可以直接讀取樣品和對照中的fT4量。該檢測系統(tǒng)中使用的標記T4（結合物）對甲狀腺素結合球蛋白（TBG）和人血清白蛋白（HSA）沒有結合特性。微孔板上的結合位點被設計為具有低結合能力，以不干擾T4與其攜帶蛋白之間的平衡。該測定在pH、溫度和離子強度的正常生理條件下進行。

測定程序

樣品預處理：無。

所有試劑在使用前必須達到室溫。校準品、對照品和樣本應以雙份進行測定。一旦開始程序，所有步驟都應連續(xù)完成，不得中斷。

1. 準備fT4-HRP結合物的工作溶液和洗滌緩沖液。

2. 取出所需數(shù)量的孔條。重新密封袋子，并將任何未使用的孔條放回冰箱。

3. 向相應標記的孔中分別準確移液25 μL的每種校準品、對照品和樣本（建議使用多通道移液管）。

4. 向每個孔中準確移液100 μL的結合物工作溶液（建議使用多通道移液管）。

5. 輕輕搖動板子10秒鐘。

6. 在37°C下孵育板子1小時。

7. 用稀釋后的洗滌緩沖液每個孔300 μL洗滌孔3次，并用吸水紙牢固拍打板子以確保其干燥（建議使用洗滌器）。

8. 在定時間隔向每個孔中準確移液150 μL的TMB底物。

9. 在37°C下孵育板子10-15分鐘（或直到校準品A達到所需的深藍色OD）。

10. 與步驟8相同的時間間隔向每個孔中準確移液50 μL的停止溶液。

11. 在加入停止溶液后20分鐘內(nèi)，在微孔板閱讀器上于450 nm處讀取板子的吸光度。*如果OD超出檢測上限或450 nm濾光片不可用，可以替換為405 nm或415 nm濾光片。光密度會較低，但這不會影響樣本結果。

計算

1. 計算每個校準品、對照品和樣本雙份的平均光密度。

2. 在半對數(shù)紙上繪制校準曲線，以平均光密度為Y軸，校準品濃度為X軸。如果使用免疫分析軟件，建議使用4參數(shù)或5參數(shù)曲線。

3. 計算每個未知樣本雙份的平均光密度。

4. 直接從校準曲線上讀取未知值。

典型校準器曲線

僅示例曲線。請勿用于計算結果。

文獻參考：

1. Ingbar SH, et al. J Clin Invest. 1965; 44(10):1679–89.

2. Robbins J. Metabolism. 1973; 22(8):1021–6.

3. Schall RF Jr., et al. Clin Chem. 1978; 24(10):1801–4.

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

作為ALPCO在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的ALPCO產(chǎn)品。