ALPCO-胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1,ELISA：用于通過酶免疫測定法直接定量測定人血清中的胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1。

預(yù)期用途：

用于人血清中胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1（IGFBP-1）的直接定量測定，通過酶聯(lián)免疫測定法。僅供研究使用。不得用于診斷程序。

艾美捷ALPCO胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1,ELISA(#ALP-11-IGFHU-E01)測試原理：

以下酶聯(lián)免疫測定試驗的原理遵循典型的兩步捕獲或“夾心”類型測定。該測定利用兩種高度特異性的單克隆抗體：一種針對IGFBP-1的單克隆抗體固定在微孔板上，另一種針對IGFBP-1不同區(qū)域的單克隆抗體與辣根過氧化物酶（HRP）結(jié)合。在第一步孵育中，樣本、校準(zhǔn)品和對照品中存在的IGFBP-1被固定在微孔板上的抗體結(jié)合。通過洗滌步驟去除過量的和未結(jié)合的物質(zhì)。在第二步孵育中，加入HRP結(jié)合物并特異性地結(jié)合任何固定的IGFBP-1，形成夾心復(fù)合物。通過洗滌步驟去除未結(jié)合的HRP結(jié)合物。接下來，加入TMB底物，與HRP反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，其與結(jié)合的IGFBP-1量成正比。通過加入終止溶液終止酶促反應(yīng)，將顏色從藍(lán)色變?yōu)辄S色。在微孔板讀數(shù)器上于450nm處測量吸光度。使用一組校準(zhǔn)品繪制校準(zhǔn)曲線，從而可以直接讀取樣本和對照品中IGFBP-1的含量。

樣本收集與儲存：

每次重復(fù)測定需要大約0.1毫升的血清。收集4-5毫升靜脈血至適當(dāng)標(biāo)記的試管中，并讓其凝固。在室溫下離心，然后小心地將血清層轉(zhuǎn)移到新的儲存管中。如果分析將在稍后進(jìn)行，可將其儲存在2-8°C下長達(dá)24小時，或在-10°C或更低的溫度下儲存。將所有人類樣本視為可能的生物危害物質(zhì)，并在處理時采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。

樣本預(yù)處理：

本測定是一個直接系統(tǒng)；不需要樣本預(yù)處理。

試劑和設(shè)備需求但不提供：

- 校準(zhǔn)的單通道移液管，用于分配25微升

- 校準(zhǔn)的多通道移液管，用于分配50微升和100微升

- 校準(zhǔn)的多通道移液管，用于分配300微升（如果手動洗滌）

- 自動微孔板洗滌器（推薦）

- 一次性移液管尖

- 蒸餾水或去離子水

- 微孔板振蕩器：

- 軌道振蕩器（直徑3毫米）設(shè)置為600轉(zhuǎn)每分鐘

- 或往復(fù)振蕩器（行程長度1.5英寸）設(shè)置為每分鐘180次振蕩

- 校準(zhǔn)的微孔板讀數(shù)器，帶有450納米的濾光片和3.0或更高的上OD限制

- 計時器

計算：

1. 計算每個校準(zhǔn)品、對照品和血清樣本重復(fù)測定的平均光密度。

2. 從校準(zhǔn)品、對照品和血清樣本的平均吸光度值中減去“0”校準(zhǔn)品的平均吸光度值。

3. 在對數(shù)-對數(shù)紙上繪制校準(zhǔn)曲線，以平均光密度為Y軸，校準(zhǔn)品濃度為X軸。如果使用免疫分析軟件，推薦使用4參數(shù)或5參數(shù)曲線。

4. 直接從校準(zhǔn)曲線上讀取對照品和樣本的值。

5. 如果樣本讀數(shù)超過220微克/升，用校準(zhǔn)品A稀釋，稀釋因子不超過1:10。所得結(jié)果應(yīng)乘以稀釋因子。

質(zhì)量控制：

在評估測試結(jié)果的有效性時，應(yīng)評估以下標(biāo)準(zhǔn)：

1. 校準(zhǔn)品A的平均光密度符合QC證書中所述的可接受范圍。

2. 試劑盒對照品所得值在QC證書中所述的可接受范圍內(nèi)。

3. 使用的任何外部對照品的結(jié)果符合可接受范圍。

典型表格數(shù)據(jù)：

僅樣本數(shù)據(jù)。不要用來計算結(jié)果。

艾美捷科技是ALPCO的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。