抗SLA ELISA是一種使用人重組SLA/LP的固相酶免疫測(cè)定法用于定量和定性檢測(cè)人類可溶性肝抗原（SLA）抗體血清。

該檢測(cè)是診斷自身免疫性肝炎（AIH）的工具。

作為ALPCO在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品抗可溶性肝抗原(SLA) - IgG EIA(96孔)。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

抗可溶性肝抗原(SLA) - IgG EIA(96孔)應(yīng)用和檢測(cè)原理：

自身免疫性肝炎（AIH）是一種慢性進(jìn)行性肝病，其起源未知，對(duì)免疫抑制治療反應(yīng)良好，但如果不治療則預(yù)后不佳。因此，早期和準(zhǔn)確的診斷非常重要。AIH的特點(diǎn)是缺乏病毒標(biāo)志物的情況下，組織學(xué)上表現(xiàn)為周?chē)T(mén)脈性肝炎，高γ球蛋白血癥，以及大多數(shù)患者血清中存在自身抗體。70%的患者有顯著滴度的抗核抗體（ANA）、平滑肌自身抗體（SMA）或肝腎微粒體自身抗體（LKM）。這些抗體對(duì)AIH具有診斷價(jià)值，但并不特異于該疾病，因?yàn)樗鼈円渤霈F(xiàn)在10-15%的病毒性肝炎和其他免疫介導(dǎo)疾病的患者中。相比之下，針對(duì)可溶性肝抗原（SLA）和肝胰抗原（LP）的抗體是唯一特異于自身免疫性肝炎的，存在于20%的所有AIH患者中，其中許多患者對(duì)其他自身抗體呈陰性。研究表明，抗-SLA和抗-LP針對(duì)的是相同的抗原，因此是相同的。2000年克隆和測(cè)序的SLA/LP抗原是一種未知功能的蛋白質(zhì)，被認(rèn)為是一種UGA-抑制劑tRNA相關(guān)蛋白。

ANA/SMA和抗-SLA陽(yáng)性患者在大多數(shù)臨床、生化、組織學(xué)和預(yù)后特征上是共享的。因此，根據(jù)自身抗體狀態(tài)區(qū)分不同的亞組在臨床上并沒(méi)有幫助。然而，對(duì)于許多對(duì)其他自身抗體呈陰性的患者來(lái)說(shuō)，檢測(cè)抗-SLA自身抗體對(duì)于AIH的診斷非常重要，否則可能會(huì)被誤診。

試劑盒組成：

需要重新配制的：

5倍樣本緩沖液1瓶，20毫升 - 5倍濃縮（白色瓶蓋：黃色溶液）

成分：Tris, 氯化鈉（NaCl）, 牛血清白蛋白（BSA）, 疊氮化鈉 < 0.1%（防腐劑）

50倍洗滌緩沖液1瓶，20毫升 - 50倍濃縮（白色瓶蓋：綠色溶液）

成分：Tris, 氯化鈉（NaCl）, 吐溫20, 疊氮化鈉 < 0.1%（防腐劑）

即用型：

陰性對(duì)照1瓶，1.5毫升（綠色瓶蓋：無(wú)色溶液）

成分：人血清（稀釋）, 疊氮化鈉 < 0.1%（防腐劑）

陽(yáng)性對(duì)照1瓶，1.5毫升（紅色瓶蓋：黃色溶液）

成分：人血清（稀釋）, 疊氮化鈉 < 0.1%（防腐劑）

截止校準(zhǔn)液1瓶，1.5毫升（藍(lán)色瓶蓋：黃色溶液）

成分：人血清（稀釋）, 疊氮化鈉 < 0.1%（防腐劑）

校準(zhǔn)液6瓶，每瓶1.5毫升，濃度分別為0, 3, 10, 30, 100, 300 U/ml

（顏色隨濃度增加而加深：黃色溶液）

成分：人血清（稀釋）, 疊氮化鈉 < 0.1%（防腐劑）

結(jié)合物1瓶，15毫升IgG（藍(lán)色瓶蓋：藍(lán)色溶液）

成分：與辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合的抗人免疫球蛋白

TMB底物1瓶，15毫升（黑色瓶蓋）

成分：穩(wěn)定的TMB/H2O2

停止液1瓶，15毫升（白色瓶蓋：無(wú)色溶液）

成分：1M鹽酸

微孔板12x8孔條，帶有可拆卸的微孔

涂覆請(qǐng)參見(jiàn)第1段。

檢測(cè)程序

移液前的準(zhǔn)備

稀釋濃縮試劑：

將濃縮樣本緩沖液按1:5的比例用蒸餾水稀釋（例如20毫升加80毫升）。

將濃縮洗滌緩沖液按1:50的比例用蒸餾水稀釋（例如20毫升加980毫升）。

樣本：

將血清樣本按1:101的比例用樣本緩沖液（1倍）稀釋

例如：1000微升樣本緩沖液（1倍）+ 10微升血清。充分混合！

洗滌：

每8個(gè)孔準(zhǔn)備20毫升稀釋洗滌緩沖液（1倍），或每96個(gè)孔準(zhǔn)備200毫升

例如：4毫升濃縮液加196毫升蒸餾水。

自動(dòng)洗滌：

考慮設(shè)置儀器和機(jī)器人移液器死體積所需的額外體積。

手動(dòng)洗滌：

將孔中的液體倒空，然后將微孔板倒置在干凈的吸水紙上，用力敲擊以去除液體。向每個(gè)孔中加入300微升稀釋洗滌緩沖液，等待20秒。重復(fù)整個(gè)程序兩次。

微孔板：

計(jì)算測(cè)試所需的孔數(shù)。從框架中移除未使用的孔，放回提供的塑料袋中，與干燥劑一起密封（2-8°C/35-46°F）。

工作流程

有關(guān)移液方案，請(qǐng)參見(jiàn)附錄A，有關(guān)測(cè)試程序，請(qǐng)參見(jiàn)附錄B

我們建議對(duì)樣本和校準(zhǔn)液進(jìn)行雙重移液。

截止校準(zhǔn)液僅用于定性測(cè)試。

● 將100微升每位患者的稀釋血清移入指定的微孔中。

● 將100微升校準(zhǔn)液或截止校準(zhǔn)液以及陰性和陽(yáng)性對(duì)照移入指定的孔中。

● 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分鐘。

● 用300微升稀釋洗滌緩沖液（1:50）洗滌3次。

● 向每個(gè)孔中加入100微升結(jié)合物。

● 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分鐘。

● 用300微升稀釋洗滌緩沖液（1:50）洗滌3次。

● 向每個(gè)孔中加入100微升TMB底物。

● 在20-32°C/68-89.6°F下，避免強(qiáng)烈光線照射，孵育30分鐘。

● 按照加入底物的相同順序，向每個(gè)孔中加入100微升停止液。

● 孵育至少5分鐘。

● 輕輕搖動(dòng)板子5秒鐘。

● 在30分鐘內(nèi)讀取450納米（可選450/620納米）處的吸光度。

文獻(xiàn)參考：

1.KrawittEL(1996).

AutoimmuneHepatitis.

NEnglJMed334:897-903.

2.MeyerzumBüschenfeldeKH,LohseAW(1995).

AutoimmuneHepatitis.

NEnglJMed333:1004-1005.

3.AlvarezF,BergPA,Bianchietal.(1999).

InternationalAutoimmuneHepatitisGroupReport:areviewofcriteriafordiagnosisofauto-

immunehepatitis.

JHepatol31:929-938.

4.CostaM,Rodriguez-SanchezJL,CzajaAJ,GelpiC(2000).

IsolationandcharacterizationofcDNAencodingtheantigenicproteinofthehumantRNP(Ser

Sec)complexrecognizedbyautoantibodiesfrompatientswithtype-1hepatitis.

ClinExpImmunol121:364-374.

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見(jiàn)長(zhǎng)。

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