IgG檢測試劑盒是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測定法（ELISA），用于定量馬血漿和血清樣本中免疫球蛋白G（IgG）的測定。用于研究用途只有。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品馬IgG ELISA試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

馬IgG ELISA試劑盒檢測原理：

雙抗體夾心ELISA的原理如圖1所示。在該檢測方法中，樣本中的IgG與吸附在聚苯乙烯微量滴定板表面的抗IgG抗體發(fā)生反應(yīng)。洗滌后去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)，隨后加入與辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的抗IgG抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的IgG形成復(fù)合物。再次洗滌后，通過加入色原底物3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來檢測結(jié)合在免疫吸附劑上的酶。結(jié)合的酶量與樣本中IgG的濃度成正比；因此，在450 nm處的吸光度反映了測試樣本中IgG的濃度。測試樣本中IgG的量可以通過從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得到，該標(biāo)準(zhǔn)曲線由標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建并根據(jù)樣本稀釋度進(jìn)行校正。

需要但未提供的材料

? 精密移液管（2?L至1000?L）用于制備和分配稀釋液

? 試管

? 噴壺或微孔板洗滌器/吸液器

? 蒸餾水或去離子水

? 微孔板讀數(shù)儀

? 各種玻璃器皿用于制備試劑和緩沖溶液

? 計(jì)時器

? 抗凝劑（用于血漿樣品收集）

? 離心機(jī)

樣品收集和處理

所有血液成分和生物材料都應(yīng)視為潛在的危險(xiǎn)物質(zhì)。處理和處置時應(yīng)遵循通用預(yù)防措施。

如果血樣凝塊、明顯溶血、混濁或樣品完整性值得擔(dān)憂，請做好記錄，并謹(jǐn)慎解讀結(jié)果。

以下列出的樣品采集和存儲條件僅供參考。樣品穩(wěn)定性尚未評估。

? 血清樣品：應(yīng)通過靜脈采血收集血液。凝固后應(yīng)通過離心將血清與細(xì)胞分離。立即進(jìn)行檢測或分裝并存儲樣品在-80°C（首選）或-20°C。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

? 血漿樣品：血液應(yīng)收集到帶有抗凝劑的容器中然后離心。立即進(jìn)行檢測或分裝并存儲樣本在-80°C（首選）或-20°C。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

? 已知干擾物質(zhì)：濃度高于0.1%的偶啶和硫黃汞均會抑制酶反應(yīng)。

樣品稀釋

該測定要求每個測試樣品在使用前必須稀釋。每次進(jìn)行測定時，所有樣品均應(yīng)重復(fù)檢測。推薦的稀釋僅供參考。稀釋應(yīng)基于未知樣品的預(yù)期濃度，以使稀釋樣品在標(biāo)準(zhǔn)曲線的動態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣品值，建議先進(jìn)行代表性樣品的串聯(lián)稀釋檢測，然后再運(yùn)行整個孔板。

? 血清和血漿樣品-推薦的起始稀釋為1:200,000。要準(zhǔn)備1:200,000的樣品稀釋，將2?L樣品轉(zhuǎn)移至1998?L的1倍稀釋液中。這樣，您獲得1:1,000的稀釋。然后通過將2?L轉(zhuǎn)移到398?L的1倍稀釋液中進(jìn)行稀釋。這樣，您獲得1:200,000的稀釋。每個階段均要充分混合。

試劑制備

? 在使用前將所有試劑室溫（16°C至25°C）恢復(fù)。

? 稀釋液濃縮液-提供的稀釋液溶液為5倍濃縮液，必須與蒸餾水或去離子水按1:5稀釋（1部分緩沖液濃縮物，4部分dH2O）。

? 洗滌液濃縮液-提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須與蒸餾水或去離子水按1:20稀釋（1部分緩沖液濃縮物，19部分dH2O）。當(dāng)存儲溫度較低時，濃縮物中可能出現(xiàn)結(jié)晶。未稀釋前將濃縮物加熱至30-35°C，可溶解結(jié)晶。

? 酶-抗體復(fù)合物-通過將10?L酶-抗體共軛物加入到990?L 1倍稀釋液中為每個微孔板測試帶計(jì)算所需的工作共軛溶液。立即稀釋使用，并遠(yuǎn)離光線。均勻但輕柔地混合。避免起泡。

? 預(yù)包被ELISA微孔板-如供應(yīng)的那樣隨用隨用。解封箔袋并取出板。取出不會在測試中使用的所有條和孔，放回到袋子中重新密封以及干燥劑。

? 馬IgG校準(zhǔn)物-按照特定批次的分析證書準(zhǔn)備。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

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