MolBoolean Mouse/Rabbit（貨號：ATL-MolB00001 ） 是一種用于組織和細(xì)胞中原位蛋白質(zhì)鄰近分析的試劑盒。MolBoolean 分析利用專有的寡核苷酸設(shè)置，能夠同時檢測兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)（蛋白 A、蛋白 B 和相互作用蛋白 AB）的游離和相互作用（~40 nm 鄰近）組分。

MolBoolean 小鼠/兔應(yīng)使用用戶選擇的一抗（在小鼠和兔中產(chǎn)生）進(jìn)行。MolBoolean 依靠抗小鼠和抗兔次級接近探針和滾環(huán)放大 （RCA） 作為放大信號的手段。

在 MolBoolean 分析中執(zhí)行的一系列分子步驟將信息整合到擴(kuò)增產(chǎn)物中，表明抗體靶標(biāo)與相互作用蛋白的結(jié)合。該信息通過檢測報告基因的結(jié)合轉(zhuǎn)換為熒光信號，從而可以在常規(guī)熒光顯微鏡上進(jìn)行可視化。提供圖像分析軟件來分割和區(qū)分熒光信號，從而能夠相對定量樣品中兩個分析蛋白質(zhì)靶標(biāo)的游離組分與相互作用組分。

MolBoolean 試劑盒包含15個獨立的試管。試劑盒體積為4.8 ml，可在細(xì)胞中進(jìn)行約120次檢測(40 μl/assay)，在組織中進(jìn)行約60次檢測(80 μl/assay)。

艾美捷MolBoolean Mouse/Rabbit（#ATL-MolB00001）成分：

TUBE NUMBER TUBE ID

1 Blocker(4x)

2 Diluent(1x)*

3 Probe A(80x)

4 Probe B(80x)

5 Circle(40x)

6 Additive(40x)

7 Buffer A(10x)

8 Nickase enzyme(80x)

9 Buffer B(8x)

10 Tag oligos(40x)

11 Ligase enzyme(80x)

12 Polymerase enzyme(40x)

13 Buffer C(5x)

14 Detection oligos(40x)

15 Buffer D(10x)

*使用前，將Tween-20加入Diluent (1x) (tube 2) 至終濃度為0.1% (v/v) 制備“完全稀釋劑”

在10ml TBS中加入0.2 ml Tween-20，制備2% (v/v)的Tween-20中間溶液。用玻璃燒杯和磁力攪拌器攪拌10分鐘。

用Diluent (1x)  (e.g. 25 ul of 2 % Tween-20 intermediate to 475 ul Diluent)稀釋得到最終的完全稀釋液。將完全稀釋液保存在4°C，并在1周內(nèi)使用。

為什么選擇MolBoolean ?

通過同時檢測自由和相互作用的蛋白質(zhì)，完成蛋白質(zhì)相互作用的空間定量分析。

通過相互作用數(shù)據(jù)歸一化到總目標(biāo)蛋白水平的精確定量。

無需工程蛋白表達(dá)的生物學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)。

通過滾動圈放大，熒光信號增加1000倍，允許檢測和定量低豐度蛋白質(zhì)。

適應(yīng)不同的研究需求。

通用試劑盒，可用于客戶選擇的一抗。

在細(xì)胞和組織中驗證。

MolBoolean Mouse/Rabbit檢測步驟：

MolBoolean 檢測包括七個步驟來檢測蛋白質(zhì)是相互作用還是單獨存在

1.Proximity Probe Binding：探針與一抗結(jié)合。

2.探針臂雜交：探針臂與 DNA 環(huán)寡核苷酸雜交。

3.DNA 切口：在 DNA 中引入缺口以進(jìn)行進(jìn)一步處理。

4.標(biāo)簽寡核苷酸摻入：將標(biāo)記的寡核苷酸摻入 DNA 中。

5.DNA 連接：DNA 末端的連接。

6.Rolling Circle Amplification：擴(kuò)增環(huán)狀 DNA 以增強信號。

7.檢測：結(jié)果的可視化和分析。

試劑盒運輸及儲存：

MolBoolean 小鼠/兔試劑盒可在固定細(xì)胞和FFPE組織樣本中進(jìn)行MolBoolean分析。試劑盒體積，4.8 ml總工作體積，足以在細(xì)胞中進(jìn)行大約120次檢測(40ul/assay)，在組織中進(jìn)行60次檢測(80ul/assay)。40?l的測定體積應(yīng)足以覆蓋1 cm2的樣品面積。相應(yīng)地調(diào)整以匹配您的實驗設(shè)置。

MolBoolean試劑盒包含15個獨立的試劑盒管，這個工具箱是用干冰運輸?shù)摹Ｊ盏胶螅瑢⑺性噭┍４嬖?20°C。Diluent (1x) 也可以在4°C下保存長達(dá)6個月。

關(guān)于MolBoolean:

克服原位聚乳酸限制

與原位聚乳酸等傳統(tǒng)方法相比，MolBoolean 具有多種優(yōu)勢，可解決數(shù)據(jù)解釋中的關(guān)鍵空白，并提供更多信息

數(shù)據(jù)規(guī)范化

與MolBoolean，蛋白質(zhì)相互作用的數(shù)量可以歸一化為目標(biāo)蛋白質(zhì)的總數(shù)。這是至關(guān)重要的，因為靶蛋白水平可以受到各種因素的影響，如細(xì)胞治療或疾病狀態(tài)。通過提供標(biāo)準(zhǔn)化的測量，MolBoolean 允許更準(zhǔn)確的樣本之間的比較。

相互作用和非相互作用的檢測

分?jǐn)?shù):與傳統(tǒng)方法不同，MolBoolean?可以檢測細(xì)胞和組織中兩種蛋白靶標(biāo)的非相互作用內(nèi)源性組分及相互作用。更全面的檢測能力增加了可以從實驗中提取的空間信息，使研究人員能夠確定蛋白質(zhì)相互作用的位置。

一致的分子過程

滾動循環(huán)產(chǎn)品(rcp)源于自由或相互作用的蛋白質(zhì)是通過相同的分子過程步驟產(chǎn)生的。這確保了均勻的信號效率，減少了數(shù)據(jù)分析過程中的不確定性。

總體而言，MolBoolean 為檢測蛋白質(zhì)相互作用提供了更可靠、更全面的解決方案，解決了數(shù)據(jù)解釋中的關(guān)鍵空白，并為研究人員提供了更準(zhǔn)確的細(xì)胞和組織中分子相互作用的見解。