Biogradetech-DPP4抑制劑篩選試劑盒（BGT-KAT-100）提供了一種方便的基于熒光的方法來篩選DPP（Ⅳ）抑制劑。該測(cè)定使用熒光底物Gly-Pro氨基甲基香豆素（AMC）來測(cè)量DPP（IV）的活性。DPP對(duì)肽鍵的切割釋放出游離的AMC基團(tuán)，產(chǎn)生的熒光可以使用350-360nm的激發(fā)波長(zhǎng)和450-465nm的發(fā)射波長(zhǎng)進(jìn)行分析。

艾美捷DPP4抑制劑篩選試劑盒特點(diǎn)：

1、篩選DPP (IV)抑制劑

2、可對(duì)46個(gè)樣本進(jìn)行雙重測(cè)定

3、包含陽(yáng)性對(duì)照抑制劑

4、基于板的熒光測(cè)量（激發(fā)波長(zhǎng)530-540納米，發(fā)射波長(zhǎng)585-595納米）

DPP4抑制劑篩選試劑盒性能特征：

Z'因子是一個(gè)用來描述檢測(cè)方法穩(wěn)健性的術(shù)語，它是通過使用下面的公式計(jì)算得出的。

Z? = 1 -（3σc+ + 3σc-）/丨?c+ - ?c-丨

Where σ: Standard deviation

?: Mean

c+: Posive control

c-: Negative control

Z'因子的理論上限為1.0。一個(gè)穩(wěn)健的檢測(cè)方法其Z'因子應(yīng)大于0.5。Cayman的DPP (IV)抑制劑篩選試劑盒的Z'因子被確定為0.96。

DPP4抑制劑篩選試劑盒示例數(shù)據(jù)：

DPP (IV)抑制劑篩選試劑盒的典型Z'數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)顯示了按照試劑盒手冊(cè)中描述準(zhǔn)備的陽(yáng)性和陰性對(duì)照孔的數(shù)據(jù)。此次實(shí)驗(yàn)計(jì)算出的Z'因子為0.96。紅色線條對(duì)應(yīng)于每個(gè)對(duì)照值的平均值偏差的三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差。

基本信息：

1、所有孔的最終檢測(cè)體積為100微升。

2、在檢測(cè)中使用稀釋后的檢測(cè)緩沖液。

3、除了酶之外，所有試劑在開始檢測(cè)前必須平衡至室溫。

4、沒有必要一次使用板上的所有孔。

5、建議以三重復(fù)進(jìn)行樣本檢測(cè)，但是否這樣做取決于用戶的判斷。

6、檢測(cè)在37°C下進(jìn)行。

7、如果不知道適當(dāng)?shù)囊种苿舛龋赡苄枰趲讉€(gè)稀釋度下進(jìn)行檢測(cè)。可以進(jìn)行每個(gè)抑制劑的稀釋系列，以確定IC50值。

8、三十個(gè)抑制劑樣本可以進(jìn)行三重復(fù)檢測(cè)，或者四十五個(gè)樣本進(jìn)行雙重復(fù)檢測(cè)。

9、使用激發(fā)波長(zhǎng)為350-360納米和發(fā)射波長(zhǎng)為450-465納米的熒光監(jiān)測(cè)。

執(zhí)行檢測(cè)：

1.初始活性孔 - 在三個(gè)孔中分別加入30微升稀釋的檢測(cè)緩沖液、10微升稀釋的DPP (IV)和10微升溶劑（用于溶解抑制劑的相同溶劑）。

2.背景孔 - 在三個(gè)孔中分別加入40微升稀釋的檢測(cè)緩沖液和10微升溶劑（用于溶解抑制劑的相同溶劑）。

3.西他列汀陽(yáng)性對(duì)照抑制劑孔 - 在三個(gè)孔中分別加入30微升稀釋的檢測(cè)緩沖液、10微升稀釋的DPP和10微升西他列汀陽(yáng)性對(duì)照抑制劑。

4.抑制劑孔 - 在三個(gè)孔中分別加入30微升稀釋的檢測(cè)緩沖液、10微升稀釋的DPP (IV)和10微升抑制劑。注意：抑制劑可以溶解在檢測(cè)緩沖液或二甲亞砜中，并且應(yīng)以10微升的最終體積加入到檢測(cè)中。乙醇和甲醇會(huì)大幅降低酶活性，因此不推薦用于溶解抑制劑。如果完全不知道需要抑制DPP (IV)的適當(dāng)濃度，我們建議檢測(cè)該化合物的幾個(gè)濃度。

5.啟動(dòng)反應(yīng) - 向所有使用的孔中各加入50微升稀釋的底物溶液。

6.蓋板孵育 - 用板蓋蓋住板子，并在37°C下孵育30分鐘。

7. 讀取熒光 - 去掉板蓋，并使用激發(fā)波長(zhǎng)為350-360納米和發(fā)射波長(zhǎng)為450-465納米的熒光讀取。可能需要調(diào)整儀器的增益設(shè)置，以便測(cè)量所有樣本。

*為了確定反應(yīng)速率和表觀IC50值，我們建議以動(dòng)力學(xué)方式讀取樣本，在30分鐘檢測(cè)讀取時(shí)間內(nèi)收集盡可能多的時(shí)間點(diǎn)。基于動(dòng)力學(xué)曲線的線性部分確定初始速率。可以通過用熒光代替，按照以下所示進(jìn)行計(jì)算。

% Inhibition =【{Inial Acvity - Inhibitor}/ Inial Acvity 】x 100