TCF/LEF報(bào)告基因-HEK293細(xì)胞系（Wnt信號(hào)通路）含有一個(gè)受TCF/LEF響應(yīng)元件控制的螢火蟲熒光素酶基因，該基因已穩(wěn)定整合入HEK293細(xì)胞中。該細(xì)胞系已驗(yàn)證對(duì)小鼠和人類Wnt3a的刺激反應(yīng)，以及對(duì)Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路抑制劑的處理反應(yīng)。

背景

TCF/LEF報(bào)告基因-HEK293細(xì)胞系（Wnt信號(hào)通路）旨在監(jiān)測Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路的活性。Wnt通路控制著胚胎發(fā)育、成年器官維持和疾病中大量且多樣化的細(xì)胞命運(yùn)決定。Wnt蛋白結(jié)合到細(xì)胞表面受體，啟動(dòng)一個(gè)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致β-連環(huán)蛋白的穩(wěn)定化和核轉(zhuǎn)移。β-連環(huán)蛋白隨后結(jié)合到核內(nèi)的TCF/LEF轉(zhuǎn)錄因子，導(dǎo)致Wnt響應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品TCF/LEF 報(bào)告基因 - HEK293 細(xì)胞系（Wnt 信號(hào)通路）。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

應(yīng)用

? 監(jiān)測Wnt信號(hào)通路的活性。

? 篩選Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路的化合物活性。

細(xì)胞培養(yǎng)協(xié)議

細(xì)胞解凍

1. 為了解凍細(xì)胞，建議快速將液氮中的冷凍細(xì)胞在37°C水浴中解凍，轉(zhuǎn)移到含有10毫升解凍培養(yǎng)基1（不含遺傳素）的試管中，以1000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心細(xì)胞，重懸細(xì)胞于5毫升預(yù)溫的解凍培養(yǎng)基1（不含遺傳素）中，將重懸的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶中，并在37°C的5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。

2. 第二天，用新鮮的預(yù)熱解凍培養(yǎng)基1（不含遺傳素）更換培養(yǎng)基，并在37°C的CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，直到細(xì)胞準(zhǔn)備好分裂。

3. 細(xì)胞應(yīng)在達(dá)到完全融合前進(jìn)行分裂。

4. 在第一次傳代時(shí)切換到生長培養(yǎng)基1B（含遺傳素）。

細(xì)胞傳代

1. 為了傳代細(xì)胞，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞，用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 分離后，加入生長培養(yǎng)基1B（含遺傳素）并轉(zhuǎn)移到試管中，離心細(xì)胞，重懸細(xì)胞于生長培養(yǎng)基1B（含遺傳素）中，并將適量的細(xì)胞懸浮液接種到新的培養(yǎng)容器中。

3. 次培養(yǎng)比例：每周1:5至1:10或每周兩次。

注意：解凍后和在低密度時(shí)，細(xì)胞可能生長速度較慢。建議在培養(yǎng)初期以大約1:4的比例分離細(xì)胞。經(jīng)過幾次傳代后，細(xì)胞生長速度增加，可以以更高的比例分離細(xì)胞。

細(xì)胞冷凍

1. 為了冷凍保存細(xì)胞，去除培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 分離后，加入生長培養(yǎng)基1B并計(jì)數(shù)細(xì)胞，然后轉(zhuǎn)移到試管中，離心細(xì)胞，并在4°C冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796或10% DMSO + 90% FBS）中重懸至約2 x 10^6細(xì)胞/毫升。

3. 將1毫升的細(xì)胞等分到冷凍小瓶中。將小瓶放置在保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

4. 次日轉(zhuǎn)移到液氮中儲(chǔ)存。

注意：建議擴(kuò)增細(xì)胞并在早期傳代時(shí)至少冷凍10瓶細(xì)胞以備將來使用。

IWR-1-endo抑制劑量反應(yīng)曲線。結(jié)果以發(fā)光百分比表示。在沒有IWR-1-endo的情況下用Wnt3a刺激的細(xì)胞的背景減去的發(fā)光量設(shè)定為100%。

圖:IWR-1吲哚抑制劑量反應(yīng)曲線。結(jié)果以發(fā)光百分比顯示。這個(gè)在不存在IWR-1-endo的情況下，用Wnt3a刺激的細(xì)胞的背景減光發(fā)光設(shè)置為100%.

文獻(xiàn)參考：

1. Clevers, H. (2006) Wnt/beta-catenin signaling in development and disease. Cell 127(3):469-480.

2. Chen, B. et al. (2009) Small molecule-mediated disruption of Wnt-dependent signaling in tissue regeneration and cancer. Nature Chemical Biology 5(2):100-10

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、新型冠狀病毒、CRISPR、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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