TetR HEK293細(xì)胞系是一種表達(dá)四環(huán)素抗性元件（TetR）阻遏蛋白的HEK293細(xì)胞系，構(gòu)建了一個(gè)基于四環(huán)素或多西環(huán)素在細(xì)胞培養(yǎng)基中存在與否的可誘導(dǎo)系統(tǒng)。這些細(xì)胞可以轉(zhuǎn)染感興趣的靶基因，該基因受強(qiáng)啟動(dòng)子和四環(huán)素操縱子的控制。在沒(méi)有四環(huán)素或多西環(huán)素的情況下，TetR結(jié)合到操縱子上并抑制轉(zhuǎn)錄。當(dāng)接觸到四環(huán)素或多西環(huán)素時(shí)，TetR對(duì)四環(huán)素抗性元件的親和力降低，從而發(fā)生感興趣的靶基因的表達(dá)。該細(xì)胞系已通過(guò)多西環(huán)素刺激進(jìn)行了驗(yàn)證。

背景

TetR，或四環(huán)素阻遏蛋白在四環(huán)素（Tc）抗生素抗性發(fā)展中發(fā)揮作用。Tc是一類(lèi)通過(guò)干擾蛋白質(zhì)合成來(lái)殺死細(xì)菌的抗生素。對(duì)Tc的抗性是通過(guò)表達(dá)Tc抗性基因發(fā)生的，這些基因由TetR調(diào)節(jié)。除了研究抗生素抗性的機(jī)制外，TetR的使用已被用作調(diào)節(jié)啟動(dòng)子表達(dá)的模式，從而創(chuàng)建可誘導(dǎo)的細(xì)胞模型。這些可誘導(dǎo)的細(xì)胞模型對(duì)于理解細(xì)胞途徑至關(guān)重要。

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應(yīng)用

瞬時(shí)四環(huán)素誘導(dǎo)的感興趣靶蛋白的表達(dá)。

細(xì)胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃冷凍細(xì)胞瓶大約60秒。一旦細(xì)胞解凍（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶中全部?jī)?nèi)容物轉(zhuǎn)移到含有10毫升預(yù)溫的解凍培養(yǎng)基1的試管中。

注意：在37°C水浴中放置過(guò)久會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在5毫升預(yù)溫的解凍培養(yǎng)基1中重懸細(xì)胞。

3. 將重懸的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶中，并在37°C的5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 培養(yǎng)24小時(shí)后，檢查細(xì)胞附著和活性。更換為新鮮的解凍培養(yǎng)基1，并在37°C的5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，直到細(xì)胞準(zhǔn)備好傳代。

5. 細(xì)胞應(yīng)在完全融合前傳代。在第一次傳代及后續(xù)傳代中，使用生長(zhǎng)培養(yǎng)基1H。

細(xì)胞傳代

1. 抽吸培養(yǎng)基，用無(wú)Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基1H并轉(zhuǎn)移到試管中。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在生長(zhǎng)培養(yǎng)基1H中重懸細(xì)胞。

4. 按照推薦的次培養(yǎng)比例1:8至1:20，每周一次或兩次接種到新的培養(yǎng)容器中。

注意：解凍后和細(xì)胞密度低時(shí)，細(xì)胞可能生長(zhǎng)速度較慢。在這些情況下，建議以1:4的比例分離細(xì)胞。經(jīng)過(guò)幾次傳代后，細(xì)胞生長(zhǎng)速度增加，可以使用更高的比例進(jìn)行分離。

細(xì)胞冷凍

1. 抽吸培養(yǎng)基，用無(wú)Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細(xì)胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基1H并計(jì)數(shù)細(xì)胞。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在4°C的細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重懸細(xì)胞至約2 x 10^6細(xì)胞/毫升。

4. 將1毫升的細(xì)胞懸浮液分裝到每個(gè)冷凍小瓶中。將小瓶放置在保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過(guò)夜保存。

5. 次日將小瓶轉(zhuǎn)移到液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

相關(guān)產(chǎn)品：

TRPM-2 HEK293 Cell Line 90331 2 vials

CSL Reporter HEK293 Cell Line 79754 2 vials

RFP/GFP Safe Harbor HEK293 Cell Line 78581 2 vials

Cas9/GFP Safe Harbor HEK293 Cell Line 78582 2 vials

GAL4 Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 60656 2 vials

GR-GAL4 Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 60655 2 vials

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