Notch信號通路控制脊椎動物和無脊椎動物組織中的細胞命運決定。

Notch信號通過跨膜配體與鄰近細胞上的Notch跨膜受體（NOTCH1/NOTCH2/NOTCH3/NOTCH4）結(jié)合而被觸發(fā)。這導(dǎo)致Notch受體的蛋白水解切割，釋放出恒定活躍的Notch受體內(nèi)細胞域（NICD）。NICD轉(zhuǎn)移到細胞核，并與轉(zhuǎn)錄因子CSL（CBF1/RBPJκ/無毛抑制因子/Lag-1）和共激活因子Mastermind結(jié)合，激活Notch響應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。

描述

Notch CSL報告基因-HEK293細胞系包含在Notch響應(yīng)元件（CSL響應(yīng)元件）控制下的螢火蟲熒光素酶基因，這些元件穩(wěn)定地整合入HEK293細胞中。將Notch表達載體轉(zhuǎn)染到這一細胞系，并激活Notch通路，將導(dǎo)致熒光素酶報告基因的表達。這一細胞系已通過Notch1DelE表達載體驗證，該載體由γ-分泌酶恒定處理，導(dǎo)致NICD的釋放和熒光素酶的表達。

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應(yīng)用

? 監(jiān)測Notch信號通路活性。

? 篩選Notch信號通路的抑制劑。

? 測試合成Notch受體（synNotch）或其他條件性激活CSL啟動子的遺傳構(gòu)建體。

所需但未提供的材料

? 培養(yǎng)基：解凍培養(yǎng)基1（BPS Bioscience #60187）

? 生長培養(yǎng)基1B（BPS Bioscience #79531）

? Lipofectamine 2000（Invitrogen #11668027）或其他轉(zhuǎn)染試劑

? DAPT（Selleckchem #S2215）：Notch通路抑制劑（γ-分泌酶抑制劑）。在DMSO中制備10 mM的庫存溶液。

? 96孔組織培養(yǎng)板或96孔組織培養(yǎng)處理的白色透明底部檢測板（Corning #3610）

? ONE-Step?熒光素酶檢測系統(tǒng)（BPS Bioscience #60690）

? 熒光素酶測定儀

圖1.Notch CSL報告基因-HEK293細胞對Notch通路抑制劑的反應(yīng)。

A. DAPT阻斷Notch報告基因活性。轉(zhuǎn)染了Notch1DelE、Notch2DelE、Notch3DelE、Notch4DelE或空載體的CSL-HEK293細胞用10 ?M DAPT或DMSO對照處理。DAPT抑制了Notch的γ-分泌酶處理，導(dǎo)致熒光素酶表達減少。

文獻參考：

Lu, F.M., et al. (1996) Constitutively active human Notch1 binds to the transcription factor CBF1 and stimulates transcription through a promoter containing a CBF1-responsive element. Proc.

Natl. Acad. Sci. USA 93(11): 5663-5667.

Kanungo, J., et al (2008) The Notch signaling inhibitor DAPT down-regulates cdk5 activity and modulates the distribution of neuronal cytoskeletal proteins. J. Neurochem. 106: 2236-2248.

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