BAFF/APRIL反應(yīng)性BCMA-NF-κB熒光素酶報告基因HEK293細胞系是一種HEK293細胞系，該細胞系在CMV啟動子的控制下表達全長人類BCMA（B細胞成熟抗原）（NM_001192），以實現(xiàn)高組成表達，以及NF-κB（核因子κB）-熒光素酶報告基因。熒光素酶報告基因由位于最小啟動子上游的NF-κB響應(yīng)元件控制。配體結(jié)合后，BCMA將啟動NF-κB信號通路，導(dǎo)致NF-κB控制的熒光素酶報告基因的表達。

這一細胞系已被證明對BAFF（B細胞激活因子）和APRIL（增殖誘導(dǎo)配體）有反應(yīng)。

背景

B細胞成熟抗原（BCMA），也稱為腫瘤壞死因子受體超家族成員17（TNFRSF17）或CD269，是由TNFRSF17基因編碼的I型膜蛋白。TNFRSF17是TNF受體超家族的細胞表面受體，識別其配體，包括BAFF（B細胞激活因子）和APRIL（增殖誘導(dǎo)配體）。BCMA在成熟的B淋巴細胞和多發(fā)性骨髓瘤（MM）細胞上優(yōu)先表達。體外實驗中，BCMA的激活促進B細胞的分化和增殖。BCMA誘導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)涉及大量細胞內(nèi)活動，包括激活NF-κB信號通路。BAFF和APRIL作為可溶性同源三聚體的生物活性區(qū)分了它們與其他TNFSF配體，如TRAIL、FasL和CD40L，后者僅作為膜結(jié)合分子活躍。

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應(yīng)用

? 在細胞模型中監(jiān)測BCMA/NF-κB信號通路活性。

? 篩選對BCMA/NF-κB信號通路有活性的化合物。

細胞培養(yǎng)協(xié)議

細胞復(fù)蘇

1. 在37°C水浴中旋轉(zhuǎn)冷凍細胞瓶大約60秒。細胞解凍后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶內(nèi)的全部內(nèi)容轉(zhuǎn)移到含有10毫升預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基1的管中。

注意：在37°C水浴中放置細胞過久會導(dǎo)致細胞活力迅速下降。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在5毫升預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基1中重懸細胞。

3. 將重懸的細胞轉(zhuǎn)移到T25或T75培養(yǎng)瓶中，并在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 培養(yǎng)24小時后，檢查細胞附著和活力。更換為新鮮的解凍培養(yǎng)基1，并繼續(xù)在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細胞準備好傳代。

5. 在細胞完全融合之前應(yīng)進行傳代。在第一次傳代及后續(xù)傳代中，使用生長培養(yǎng)基1A。

細胞傳代

1. 吸去培養(yǎng)基，用不含Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細胞。

2. 用0.05%胰蛋白酶/EDTA處理細胞，直至細胞脫落所需的最短時間（大約30秒至1分鐘）。使用顯微鏡確認細胞脫落。

3. 一旦細胞脫落，加入生長培養(yǎng)基1A并轉(zhuǎn)移到管中。

4. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在生長培養(yǎng)基1A中重懸細胞。

5. 按推薦的亞培養(yǎng)比例1:6至1:10每周一次或兩次播種到新的培養(yǎng)容器中。

注意：解凍后和在低密度時，細胞可能生長速度較慢。建議在培養(yǎng)初期以大約1:4的比例分離細胞。經(jīng)過幾次傳代后，細胞生長速度增加，可以以更高的比例分離細胞。

細胞冷凍

1. 吸去培養(yǎng)基，用不含Ca2+/Mg2+的PBS洗滌細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細胞。

2. 一旦細胞脫落，加入生長培養(yǎng)基1A并計數(shù)細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基，并在4°C細胞冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重懸細胞，濃度約為2 x 10^6細胞/毫升。

4. 將1毫升細胞懸浮液分裝到每個冷凍管中。將管放入絕緣容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜儲存。

注意：建議在早期傳代擴展細胞并至少冷凍10管細胞以備將來使用。

圖1：流式細胞儀分析BAFF/APRIL反應(yīng)性BCMA NF-κB HEK293細胞系中BCMA細胞表面表達。

BAFF/APRIL反應(yīng)性BCMA NF-κB-HEK293細胞（綠色）和對照親本NF-κB-HEK293細胞（藍色）用PE抗人CD269（BCMA）抗體（Biolegend #357503）染色，并通過流式細胞儀分析。Y軸表示細胞數(shù)量百分比。X軸表示PE強度。

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