Hypoxyprobe-1是一種取代的2-硝基咪唑，其化學(xué)名稱為吡默尼達(dá)唑鹽酸鹽，分子量為290.8；水溶性為400毫摩爾（116 mg/ml）；在324 nm波長處的紫外吸收（0.9%生理鹽水中消光系數(shù)為7020）。游離堿基吡默尼達(dá)唑的分子量為254.3，pKa為8.7，辛醇-水分配系數(shù)為8.5。

固體Hypoxyprobe-1在柔和光照下室溫保存了兩年，并在4°C的0.9%生理鹽水（100 g/l）中保存了4.5年，沒有檢測到降解（紫外線和HPLC分析）。

吡默尼達(dá)唑在缺氧細(xì)胞中被還原活化，并與蛋白質(zhì)、肽和氨基酸中的硫醇（巰基）基團(tuán)形成穩(wěn)定的加合物。FITC-MAb1與這些加合物結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)免疫化學(xué)檢測。

FITC-MAb1是一種熒光素標(biāo)記的抗吡默尼達(dá)唑大鼠IgG1單克隆抗體（MAb克隆11.23.22.R），濃度為0.5 mg/ml，溶于含有0.09%穩(wěn)定劑proclin的PBS中。感興趣的組織可以通過在冷凍固定切片或福爾馬林固定的石蠟包埋切片上進(jìn)行免疫組化，或通過組織解離后的流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行研究。

注意：FITC-MAb1與吡默尼達(dá)唑的蛋白質(zhì)、肽和氨基酸加合物結(jié)合，但在免疫組化過程中，組織處理會(huì)洗去肽和氨基酸加合物，因此免疫組化缺氧檢測依賴于缺氧組織中吡默尼達(dá)唑的蛋白質(zhì)加合物。

染色的抗FITC二級(jí)試劑是一種親和純化的兔IgG多克隆抗體，與辣根過氧化物酶結(jié)合，專為Hypoxyprobe, Inc.制備。過氧化物酶標(biāo)記的抗FITC二級(jí)試劑在福爾馬林固定、石蠟包埋的大鼠腫瘤組織中提供強(qiáng)烈的免疫染色，并且背景信號(hào)非常低。

艾美捷Hypoxyprobe-Hypoxyprobe-1 Plus Kit（HP2-XXX）：

應(yīng)用：用于細(xì)胞和組織缺氧的免疫化學(xué)檢測，包括免疫熒光、免疫過氧化物酶法或流式細(xì)胞術(shù)。當(dāng)將Hypoxyprobe-1 Plus Kit與抗FITC二級(jí)試劑結(jié)合使用時(shí)，來自大鼠組織的天然綠色熒光蛋白（通常會(huì)干擾缺氧信號(hào)）產(chǎn)生的背景信號(hào)非常低。

數(shù)量：

a. 三種不同規(guī)格的Hypoxyprobe-1 Plus Kit分別含有100 mg、200 mg或1000 mg的吡默尼達(dá)唑鹽酸鹽。每千克體重60 mg的劑量足以用于動(dòng)物研究。

b. 三種不同規(guī)格的Hypoxyprobe-1 Plus Kit還包含一個(gè)瓶（100 mg和200 mg Kit）或兩個(gè)瓶（1000 mg Kit），每瓶含有200微升抗吡默尼達(dá)唑的FITC標(biāo)記的IgG1大鼠單克隆抗體（克隆11.23.22.R）。每瓶含有200微升濃度為0.50 mg/ml的FITC-MAb1溶液，溶于含有1% BSA和0.09%疊氮化鈉的PBS中。FITC-MAb1的最佳稀釋度由研究人員確定，但在與1:50-100稀釋的過氧化物酶標(biāo)記的抗FITC二級(jí)試劑結(jié)合使用時(shí)，1:50-100的稀釋度在大鼠腫瘤組織中能夠產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫染色。雖然FITC-MAb1并非專為免疫熒光設(shè)計(jì)，但也可用于此目的。通常，免疫熒光的抗體稀釋度低于免疫過氧化物酶檢測的稀釋度。

不提供：用于免疫組織化學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)試劑。

儲(chǔ)存：

a. 將Hypoxyprobe-1固體在室溫下避光保存（也可存放在2-8°C）。

b. 將FITC-MAb1和HRP標(biāo)記的兔抗FITC在2-8°C避光保存。不可冷凍。

Hypoxyprobe-Hypoxyprobe-1 Plus Kit檢測步驟：

1、正常或腫瘤組織缺氧的研究開始于通過靜脈注射、腹腔注射或口服給予60 mg/kg體重的Hypoxyprobe-1（吡默尼達(dá)唑鹽酸鹽）溶液。對(duì)于一只25克的大鼠，這相當(dāng)于1.5 mg/只。在小鼠中使用高達(dá)400 mg/kg的劑量也未發(fā)現(xiàn)毒性或組織缺氧的變化，但60 mg/kg的劑量可在最低成本下獲得良好的免疫染色。

2、Hypoxyprobe-1在生理鹽水中的溶解度為116 mg/ml，因此可以使用非常小的體積來給予Hypoxyprobe-1。注射或攝入后，吡默尼達(dá)唑分布到包括大腦在內(nèi)的所有組織，但僅在氧濃度低于14微摩爾的細(xì)胞中與含硫蛋白形成加合物——相當(dāng)于37°C下的部分壓力pO2 = 10 mm Hg。除了腫瘤外，肝臟、腎臟和皮膚等正常組織中也存在pO2 = 10 mmHg時(shí)的細(xì)胞。這些正常組織會(huì)與Hypoxyprobe-1結(jié)合。

3、Hypoxyprobe-1在小鼠中的血漿半衰期約為25分鐘（有關(guān)參考信息，請(qǐng)見www.hypoxyprobe.com上的FAQ鏈接）。作為比較，大鼠的血漿半衰期為45分鐘，犬為90分鐘，人類為300分鐘。在給予Hypoxyprobe-1后15至90分鐘內(nèi)可以采集感興趣的大鼠組織。在采集時(shí)，組織中存在的Hypoxyprobe-1將在解剖組織缺氧時(shí)被結(jié)合，但與在15至90分鐘實(shí)驗(yàn)中組織暴露的Hypoxyprobe-1量相比，殘留的Hypoxyprobe-1量非常小，因此由于殘留的Hypoxyprobe-1引起的非特異性結(jié)合是不可檢測的。

圖.福爾馬林固定的吡嘧達(dá)唑結(jié)合的免疫過氧化物酶染色

使用1:100稀釋度的FITCMAb1和1:100稀釋的辣根過氧化物酶偶聯(lián)的兔抗FITC IgG從嚙齒動(dòng)物腫瘤中切下石蠟包埋組織切片。

Hypoxyprobe 致力于為氧代謝紊亂引起的惡性和正常組織疾病提供診斷和治療工具。

艾美捷科技是Hypoxyprobe的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。